臨床骨科患者中可觀察到骨折生理性愈合,以及病理性的骨延遲愈合、骨不愈合等過程,其生物學機制復雜,是目前研究領域的熱點和難點。近年研究顯示,經(jīng)典及非經(jīng)典Wnt信號通路在調(diào)控骨組織愈合過程中至關重要,同時外周神經(jīng)系統(tǒng)分泌的神經(jīng)肽類物質(zhì)也在骨組織愈合中發(fā)揮重要作用�；谏鲜鍪聦�,本研究擬回答下列幾個問題:1神經(jīng)肽類物質(zhì)是否通過Wnt信號通路調(diào)控骨組織愈合;2該調(diào)控的具體分子機制如何;3該調(diào)控的細胞生物學效應如何。第1部分:探討骨折愈合模型中Wnt信號通路的表達情況及神經(jīng)肽類物質(zhì)對其的調(diào)控效應。目的:篩選可能調(diào)控經(jīng)典及非經(jīng)典Wnt信號通路的神經(jīng)肽類物質(zhì)并初步探討其效應。方法:首先,通過制作小鼠骨折模型,于術后一周獲取小鼠的骨折愈合骨痂組織,分析組織內(nèi)神經(jīng)肽類物質(zhì)如降鈣素基因相關肽（Calcitonin generelated peptide,CGRP）、P物質(zhì)（Substance p,SP）、血管活性腸肽（Vasoactive Intestinal Peptide,VIP）和神經(jīng)肽Y（Neuropeptide Y,NPY）,以及經(jīng)典Wnt信號通路配體Wnt3a及非經(jīng)典Wnt信號通路配體Wnt5... 

【文章來源】：暨南大學廣東省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：123 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

經(jīng)典及非經(jīng)典Wnt信號通路示意圖

圖 1-6 神經(jīng)肽 NPY 對小鼠骨髓細胞成骨蛋白表達影響?zhàn)B的成骨分化 BMSCs 在神經(jīng)肽 NPY 刺激下 ALP、RunX2 和β-a帶（A），ALP（B）和 RunX2（C）蛋白質(zhì)改變對比Figure 1-6 influencec of NPY on osteoblastic gene expressions in bferentiation ofALP, RunX2 and β-actin protein expression bands (unX2 (C) proteins in osteoblast differentiated BMSCs induced by

2.3 結果2.3.1 成骨性 MC3T3-E1 細胞及破骨性 RAW264.7 細胞培養(yǎng)光鏡下觀察成骨性MC3T3-E1細胞及破骨性RAW264.7細胞（圖2-1），結果顯示：（1）原代MC3T3-E1細胞呈密集排列的不規(guī)則形狀，經(jīng)過7 d成骨誘導培養(yǎng)后，細胞呈砂礫狀；經(jīng)過茜素紅染色結果示各實驗組細胞外基質(zhì)均有不同程度的鈣鹽沉積。（2）RAW264.7細胞呈現(xiàn)小圓形細胞，細胞生長迅速，經(jīng)過破骨誘導培養(yǎng)7 d后，細胞呈現(xiàn)梭形、大的不規(guī)則圓形等多種形態(tài)。圖2-1 小鼠MC3T3-E1和RAW264.7細胞成骨/破骨誘導培養(yǎng)Figure 2-1 Differentiation processes of MC3T3-E1 and RAW264.72.3.2 siRNA/β-catenin 及 siRNA/NLK 慢病毒轉(zhuǎn)染 MC3T3-E1 細胞的穩(wěn)定細胞株將通過搭載小分子干擾β-catenin或者NLK基因RNA片段的慢病毒，導入正常培養(yǎng)的MC3T3-E1細胞內(nèi)，將其細胞進行成骨誘導培養(yǎng)，分析經(jīng)典或者非經(jīng)典Wnt信號通路的改變情況


本文編號：3527617