研究背景與目的:骨肉瘤（osteosarcoma）是最常見的骨惡性腫瘤,肺轉(zhuǎn)移是其致死的重要原因。研究表明,細(xì)胞失巢凋亡抵抗是促進腫瘤轉(zhuǎn)移的重要因素,但是,失巢凋亡抵抗促進骨肉瘤肺轉(zhuǎn)移的機制尚不明確。我們前期實驗研究顯示,FASN在骨肉瘤合并肺轉(zhuǎn)移患者中高表達。在本研究中,我們探索FASN在骨肉瘤失巢凋亡抵抗促進肺轉(zhuǎn)移的作用及其分子機制。研究方法:1、骨肉瘤細(xì)胞（143B、MG-63、Saos-2）與正常成骨細(xì)胞（hFOB1.19）抗失巢凋亡能力的研究:采用臺盼藍細(xì)胞染色檢測細(xì)胞失巢狀態(tài)下的存活率,采用克隆形成實驗檢測細(xì)胞失巢后克隆形成能力,采用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞失巢凋亡率,比較骨肉瘤及正常成骨細(xì)胞的失巢凋亡抵抗能力。2、FASN在骨肉瘤細(xì)胞抗失巢凋亡中的作用:在骨肉瘤細(xì)胞（143B、MG-63、Saos-2）與正常成骨細(xì)胞（hFOB1.19）中,采用Western-blot、qPCR、ICC檢測FASN及pERK1/2、Bcl-xl表達水平。探索FASN/pERK1/2/Bcl-xl分子信號通路在骨肉瘤細(xì)胞失巢凋亡中的作用。3、改變FASN表達,驗證FASN在失巢凋亡抵抗中的作用及機... 

【文章來源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：84 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

4種細(xì)胞懸浮0、2、4、6天的細(xì)胞存活率

圖 1B&C 4 種細(xì)胞懸浮培養(yǎng) 7 天后貼壁細(xì)胞克隆形成率。Figure1B&C The colony formation rate of four cell lines after suspended culture for 7 days.**：p＜0.01，兩組間比較，差異具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義。3.1.3 懸浮培養(yǎng) 143B、MG-63、Saos-2、hFOB1.19 細(xì)胞，骨肉瘤細(xì)胞失巢凋亡率低于正常成骨細(xì)胞。我們將骨肉瘤細(xì)胞株 143B、MG-63、Saos-2 和非腫瘤細(xì)胞（正常成骨細(xì)胞hFOB 1.19 在低貼壁的培養(yǎng)板中進行懸浮培養(yǎng)，懸浮培養(yǎng) 48h 后，使用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率 (圖 1D&E)。結(jié)果顯示(圖 1D&E)：懸浮培養(yǎng) 48h 后，腫瘤細(xì)胞 143B(13.33±0.88)、MG-63(27.67±1.45) 凋 亡 率 明 顯 低 于 hFOB1.19(41.33±1.856) 和Saos-2(38.67±1.8±56)。這一結(jié)果進一步提示，腫瘤細(xì)胞 143B 和 MG-63 具有很強抗失巢凋亡能力。

圖 1D&E 4 種細(xì)胞懸浮培養(yǎng) 48h 檢測細(xì)胞凋亡率Figure1D&E The apoptotic rate of four cell lines after suspended culture for 48h.*：p＜0.05，兩組間比較，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。**：p＜0.01，兩組間比較，差異具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義。3.1.4 懸浮培養(yǎng) 143B、MG-63、Saos-2、hFOB1.19 細(xì)胞，檢測促凋亡蛋白 c-Caspases3 表達量。我們將骨肉瘤細(xì)胞株 143B、MG-63、Saos-2 和非腫瘤細(xì)胞（正常成骨細(xì)胞）hFOB 1.19 分別種植普通培養(yǎng)板/低貼壁的培養(yǎng)板中進行貼壁/懸浮培養(yǎng)，培養(yǎng) 48h后，western-blot 檢測貼壁和懸浮狀態(tài)下各細(xì)胞 c-Caspases3 表達量 (圖 1F)。結(jié)果顯示(圖 1F)：貼壁培養(yǎng)狀態(tài)下，4 種細(xì)胞中 c-Caspases3 表達量均低。懸浮培養(yǎng)狀態(tài)下，非腫瘤細(xì)胞 hFOB1.19 中 c-Caspases3 表達量最高，腫瘤細(xì)胞中，Saos-2 表達最高, 其次為 MG-63，143B 細(xì)胞表達量最低。這提示，高增殖

【參考文獻】：
期刊論文
[1]凋亡抑制基因Bcl-xL的研究進展[J]. 郭文娟,王愛英.  世界華人消化雜志. 2008(25)

博士論文
[1]miRNA-200b影響失巢凋亡的機制及其表達的自我調(diào)節(jié)[D]. 張緒森.北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 2013



本文編號：3506954