目的:探索E2F1對(duì)脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞（Adipose mesenchymal stem cells,ADSCs）旁分泌功能的影響,E2F1^-/-ADSCs對(duì)小鼠創(chuàng)面愈合進(jìn)程的作用及其相關(guān)的作用機(jī)制。方法:選取6-8周齡野生型（WT）和E2F1基因敲除(E2F1^-/-)小鼠,分離培養(yǎng)WT ADSCs和E2F1^-/-ADSCs,培養(yǎng)至第4代（P4）,顯微鏡下觀察比較兩組細(xì)胞形態(tài),并采用流式細(xì)胞術(shù)對(duì)ADSCs相關(guān)特異性表面標(biāo)志物分子進(jìn)行鑒定,經(jīng)成脂分化誘導(dǎo),行油紅O染色。建立WT小鼠背部全層皮膚缺損創(chuàng)面模型,實(shí)驗(yàn)設(shè)置為三組,分別給予:（1）磷酸鹽緩沖生理鹽水（PBS）注射;（2）WT ADSCs;（3）E2F1^-/-ADSCs。記錄不同愈合時(shí)段（0 d、3 d、7 d、10d、14 d）創(chuàng)面愈合情況,并計(jì)算各組創(chuàng)面愈合率,比較各組在不同時(shí)間點(diǎn)創(chuàng)面愈合速度的差別;術(shù)后14天,HE染色觀察并比較各組愈合情況;Masson染色評(píng)估各組創(chuàng)面新生皮膚組織膠原沉積情況。Ki67（綠色熒光）與CD31（紅色）免疫熒光染... 

【文章來源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

WT和E2F1-/-小鼠鼠尾DNA瓊脂糖凝膠電泳圖：條帶4為WT小鼠（172bp），條帶1、3、6-8均為E2F1-/-小鼠（227bp），條帶2和5為雜合子小鼠（172bp&227

圖 2：P4 代 E2F1-/-ADSCs 和 WTADSCs 細(xì)胞顯微鏡觀察1-/-ADSCs 和 WTADSCs 流式鑒定流式細(xì)胞術(shù)對(duì) WTADSCs 和 E2F1-/-ADSCs 進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，E2F1-/、 CD44、 CD90 、CD31 表達(dá)率分別為：99.9% 、96.4%、 99.9%、 0，在 WTADSCs 表達(dá)率分別為：100%、96.8%、99.9%、0.19%。結(jié)果胞均高表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)志物 CD29、CD44 和 CD90，低表達(dá)血面標(biāo)志物 CD31，符合 ADSCs 的表型特征（圖 3）。

圖 3： E2F1-/-ADSCs 和 WTADSCs 流式表型2F1-/-ADSCs 和 WTADSCs 均具有成脂分化能力在 ADSCs 成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)基的環(huán)境下，兩組 ADSCs 細(xì)胞包漿由梭形逐變大變漸可在鏡下觀察到折光性小脂滴。誘導(dǎo)第 14 天，脂滴逐漸增多，形態(tài)變大而 O 染色可見細(xì)胞內(nèi)脂滴顆粒被紅染，呈亮紅色葡萄串樣顆粒，提示細(xì)胞已成化為成熟的脂肪細(xì)胞（圖 4）。


本文編號(hào)：3489831