發(fā)布時間：2021-11-10 02:14

　　目的:探討spastin能否進(jìn)行SUMO（Small ubiquitin-like modifiers）化修飾及SUMO化修飾如何調(diào)控微管動態(tài)性從而影響神經(jīng)元生長發(fā)育。方法:首先,用pull down、Co-IP、免疫細(xì)胞熒光染色及BIFC的方法檢測spastin在體內(nèi)外是否與SUMO結(jié)合。通過軟件預(yù)測spastin潛在的SUMO化位點,并通過免疫熒光化學(xué)和分子實驗鑒定spastin的SUMO化修飾位點。然后,根據(jù)突變位點構(gòu)建的突變體質(zhì)粒轉(zhuǎn)染神經(jīng)元,細(xì)胞免疫熒光化學(xué)觀察神經(jīng)元突起生長的變化。將spastin與SUMO1或SENP1共轉(zhuǎn)COS1細(xì)胞,確定不同spastin SUMO化修飾狀態(tài)對微管切割的影響。用免疫熒光染色的方法分析spastin K427R如何影響微管的動態(tài)性;接下來過表達(dá)spastin K427R觀察spastin K427R促進(jìn)或抑制微管的修飾,并確定其對海馬神經(jīng)元生長的影響;最后,通過免疫細(xì)胞化學(xué)染色觀察spastin對不同修飾狀態(tài)下微管切割活性的影響,確定spastin對不同修飾狀態(tài)的海馬神經(jīng)元突起生長的影響。結(jié)果:（1）Pull down及Co-IP實驗顯示,... 

【文章來源】：暨南大學(xué)廣東省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：107 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

脊髓損傷后新生側(cè)枝再生模式

圖 2 微管的結(jié)構(gòu)。（引自 Westermann S, Weber K. Post-translational modificationregulate microtubule function[J]. Nature Reviews Molecular Cell Biology, 20034(12):938-47.）3.2 微管 C 末端是微管翻譯后修飾的重要結(jié)構(gòu)微管蛋白α和β單體由約450個氨基酸殘基組成，分子量為55kDa。微管蛋白結(jié)構(gòu)緊湊，總長度約為8nm，可分為三個功能區(qū)：氨基端區(qū)(N端)、中間區(qū)和羧基端區(qū)(C端)[25]。N末端區(qū)域包含氨基酸殘基1-205，不同的微管蛋白亞型在該區(qū)域有40%同源性，N末端區(qū)域的一個特殊性是存在一個三磷酸鳥苷(GTP)的單一結(jié)合位點，這是介導(dǎo)微管動力學(xué)所必需的[26-28]。中間結(jié)構(gòu)域?qū)?yīng)于206-381個殘基，包括一個蛋白酶敏感位點，該區(qū)域還含有一個與β-微管蛋白亞型有關(guān)的MT穩(wěn)定劑紫杉醇的結(jié)合位點[29]。C末端區(qū)域位于微管表面向外的區(qū)域，使其易于微管蛋白翻譯后修飾(PTMS)和與微管相關(guān)蛋白進(jìn)行相互作用，從而調(diào)節(jié)微管的功

T組織和翻譯后修改的示意圖。MTS為長而直的空心圓柱體，主要原絲組成。它們通過添加αβ-微管蛋白的雜二聚體進(jìn)行聚合，它們式聚集在一起。MTS是極性結(jié)構(gòu)，具有快速生長的正端(β-微管蛋(α-微管蛋白暴露)。微管蛋白的翻譯后修飾在MT的同一性中產(chǎn)生了


本文編號：3486365