發(fā)布時(shí)間：2017-05-06 08:12

  本文關(guān)鍵詞：肽基凝膠誘導(dǎo)NT-3基因修飾BMSCs向神經(jīng)細(xì)胞分化研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究目的:構(gòu)建體外脊髓組織工程模塊,探討在含IKVAV肽基凝膠三維培養(yǎng)下,NT-3基因修飾的BMSCs向神經(jīng)細(xì)胞分化情況。研究方法:1、采用全骨髓貼壁法分離、培養(yǎng)細(xì)胞,進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察、流式細(xì)胞術(shù)表面抗原檢測(cè)、觀察其向成脂方向誘導(dǎo)分化,CCK-8繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn)。2、使用NT-3過(guò)表達(dá)腺病毒(Ad-NT-3-RFP)對(duì)BMSCs進(jìn)行基因修飾,48h后熒光顯微鏡下觀察標(biāo)記蛋白R(shí)FP在轉(zhuǎn)染后BMSCs中表達(dá)情況,ELISA法檢測(cè)修飾后BMSCs NT-3蛋白表達(dá)情況。3、通過(guò)含細(xì)胞的培養(yǎng)液促發(fā)多肽溶液自組裝形成三維培養(yǎng)體系,實(shí)驗(yàn)分成三組:凝膠-NT3組(經(jīng)NT-3病毒轉(zhuǎn)染后三維培養(yǎng))、凝膠-RFP組(經(jīng)RFP對(duì)照病毒轉(zhuǎn)染后三維培養(yǎng))、NT-3組(只經(jīng)NT-3病毒轉(zhuǎn)染)。運(yùn)用qRT-PCR及Western blot檢測(cè)各組BMSCs細(xì)胞中MAP-2、GFAP mRNA及蛋白表達(dá)水平。研究結(jié)果:1、分離獲取的BMSCs呈梭行,流式細(xì)胞測(cè)定顯示細(xì)胞高表達(dá)CD29,不表達(dá)CD34,經(jīng)成脂誘導(dǎo)2周出現(xiàn)脂滴,油紅O染色成紅色。2、使用Ad-NT-3-RFP轉(zhuǎn)染BMSCs 48h后,細(xì)胞中出現(xiàn)明顯的RFP表達(dá),細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率均在90%以上。ELISA檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液中NT-3含量,細(xì)胞液中第1天就開(kāi)始出現(xiàn)NT-3蛋白,第3天NT-3蛋白濃度明顯升高。到第5天后,每天培養(yǎng)液中NT-3蛋白濃度未出現(xiàn)明顯差異。3、qRT-PCR和Western blot結(jié)果顯示:凝膠-NT3組中MAP-2、GFAP mRNA及蛋白表達(dá)水平較凝膠-RFP組和NT-3組明顯增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:含IKVAV肽基凝膠具有明顯誘導(dǎo)NT-3基因修飾的BMSCs向神經(jīng)細(xì)胞分化的作用。
【關(guān)鍵詞】：組織工程模塊 BMSCs NT-3 IKVAV 肽基凝膠 神經(jīng)分化
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R651.2
【目錄】：

• 摘要3-4
• ABSTRACT4-8
• 中英文縮略詞表8-9
• 第1章 前言9-11
• 第2章 材料與方法11-23
• 2.1 材料11-14
• 2.1.1 SD大鼠11
• 2.1.2 細(xì)胞11
• 2.1.3 腺病毒來(lái)源11
• 2.1.4 多肽來(lái)源11
• 2.1.5 主要試劑和實(shí)驗(yàn)設(shè)備11-13
• 2.1.6 主要溶液的配制13-14
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法14-23
• 2.2.1 BMSCs分離及培養(yǎng)14
• 2.2.2 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞鑒定14-15
• 2.2.3 細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn)測(cè)定（CCK-8）比色法15-16
• 2.2.4 腺病毒轉(zhuǎn)染BMSCs及相關(guān)蛋白檢測(cè)16-17
• 2.2.5 脊髓組織工程模塊構(gòu)建及細(xì)胞分化檢測(cè)17-21
• 2.2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理21-23
• 第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果23-30
• 3.1 BMSCs的培養(yǎng)與傳代23-24
• 3.2 流式細(xì)胞儀檢測(cè)BMSCs表面標(biāo)記抗原CD29、CD34的表達(dá)24
• 3.3 BMSCs的成脂誘導(dǎo)和油紅染色結(jié)果24-25
• 3.4 BMSCs生長(zhǎng)曲線(xiàn)25
• 3.5 病毒轉(zhuǎn)染后紅色熒光蛋白表達(dá)情況25-26
• 3.6 ELISA檢測(cè)轉(zhuǎn)染后BMSCs NT-3表達(dá)情況26
• 3.7 多肽分子檢測(cè)及自組裝結(jié)果26-27
• 3.8 BMSCs神經(jīng)分化檢測(cè)27-30
• 3.8.1 BMSCs形態(tài)學(xué)觀察27-28
• 3.8.2 BMSCs神經(jīng)分化后神經(jīng)標(biāo)志物q RT-PCR結(jié)果28-29
• 3.8.3 BMSCs神經(jīng)分化后神經(jīng)標(biāo)志物Western-Blot結(jié)果29-30
• 第4章 討論30-34
• 第5章 結(jié)論與展望34-35
• 5.1 結(jié)論34
• 5.2 展望34-35
• 致謝35-36
• 參考文獻(xiàn)36-38
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果38-39
• 綜述 脊髓組織工程研究進(jìn)展39-48
• 參考文獻(xiàn)45-48

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