[目的]檢測骨巨細胞瘤中P62、RANK、RANKL基因及蛋白的表達水平并分析相關性,明確P62蛋白表達對骨巨細胞瘤細胞增殖能力的影響,為骨巨細胞瘤的臨床治療尋找新的靶點。[方法]1、采用基因測序檢測13例骨巨細胞瘤新鮮組織中P62基因在Exons 7和Exons 8之間點突變情況,采用qRT-PCR及Western blot檢測8例骨巨細胞瘤新鮮組織和瘤旁組織中P62、RANK、RANKL mRNA和蛋白的表達情況,并分析三者相關性。2.留取骨巨細胞瘤新鮮組織,進行細胞分離,培養(yǎng)單核基質細胞,使用慢病毒質粒轉染上調或下調P62基因表達,通過CCK8試劑盒、流式細胞術檢測,觀察P62基因的表達對單核基質細胞的細胞增殖、細胞周期、細胞凋亡的影響。[結果]1、基因測序結果顯示,P62基因在Exons 7和Exons 8之間的1340bp位置有G1340A突變,但是在415位置的氨基酸R（精氨酸）未發(fā)生突變;qRT-PCR結果顯示骨巨細胞瘤組織中 P62mRNA（P=0.0459）、RANK mRNA（P=0.0007）、RANKLmRNA（P=0.0001）的表達水平顯著高于瘤旁組織,且R... 

【文章來源】：昆明醫(yī)科大學云南省

【文章頁數】：59 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２Ａ：?ｑＲＴ－ＰＣＲ檢測Ｐ６２ｍＲＮＡ在ＧＣＴＢ組織中較瘤旁組織的表達升高；Ｂ：?ＲＡＮＫ??ｍＲＮＡ達ＧＣＴＢ組組織；Ｃ：?ＲＡＮＫＬｍＲＮＡ的表達在ＧＣＴＢ組織??

：－ｍＲＮＡ的表達在ＧＣＴＢ組織較瘤旁組織升高；Ｃ：?ＲＡＮＫＬｍＲＮＡ的表達在ＧＣＴＢ組織??較瘤旁組織升高；＊：?Ｐ＜〇．〇５；?＊＊：Ｐ＜０．０１；?＊＊＊：Ｐ＜０．００１；??２．２?Ｐ６２、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫＬｍＲＮＡ?相關性分析??我們將ｑＲＴ－ＰＣＲ檢測結果采用Ｓｐｅａｒｍａｎ秩相關分析，結果顯示ＲＡＮＫＬ與??ＲＡＮＫ?相關系數（Ｒ２＝０．５４３５，Ｐ＜０．０００１）?，?Ｐ６２?和?ＲＡＮＫＬ?相關系數（Ｒ２＝０．３５０５，??Ｐ＜０．０００１），Ｐ６２?和?ＲＡＮＫ?相關系數（Ｒ２＝０．３３２５，?Ｐ＜０．０００１），提示?Ｐ６２ｍＲＮＡ、??ＲＡＮＫ?ｍＲＮＡ及ＲＡＮＫＬ?ｍＲＮＡ三者兩兩之間呈正相關，如圖３：??圖２：?Ｐ６２、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫＬｍＲＮＡ三者相關性分析??

一?只通?ｔ?‘?？?？?＿?———“？？＃？?？??ｐ－Ａｃｔｉｎ?ｍｍ?—?＾－Ａｃｔ，ｎ?—＞?一?ｐ．Ａｃｔｉｎ??Ｔ１?Ｎ１?Ｔ２?Ｎ２?ＴＪ?Ｎ３?Ｔ４?Ｎ４?Ｔ１?Ｎ１?Ｔ２?Ｎ２?Ｔ３?Ｎ３?Ｔ４?Ｎ４?Ｔ１?Ｎ１?Ｔ２?Ｎ２?Ｔｔ?ＮＳ?Ｔ４?Ｎ４??ｐ－Ａ＜ｔ，＾?—?＾?＾?＾?（ｊ－Ａｃｔｉｎ?＿??Ｔ５?ＮＳ?ＴＶ?Ｎ（?Ｔ７?Ｎ７?Ｔ８?Ｎ８?Ｔ５?Ｎ５?Ｔｆ?Ｎ（?Ｔ７?Ｎ？?Ｔ８?Ｎｔ?ＴＳ?ＮＳ?Ｔ（?Ｎ（?Ｔ７?Ｎ７?Ｔ８?Ｎ８??圖４?Ａ：?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ檢測Ｐ６２蛋白在ＧＣＴＢ組織中高表達，灰度分析顯示Ｐ６２蛋白在ＧＣＴＢ??組織中較瘤旁組織表達升高；Ｂ：?ＲＡＮＫ蛋白在ＧＣＴＢ組織中較瘤旁組織表達升高；Ｃ：??ＲＡＮＫＬ蛋白在ＧＣＴＢ組織中較瘤旁組織表達升高；Ｄ、Ｅ、Ｆ：?Ｐ６２、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫＬ??蛋白在ＧＣＴＢ組織中呈高表達表達情況；＊：?Ｐ＜０．０５；?＊＊：Ｐ＜０．０１；?＊＊＊：Ｐ＜０．００１；??２．４?Ｐ６２、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫＬ蛋白相關性分析??我們將蛋白質印跡檢測結果采用Ｓｐｅａｒｍａｎ秩相關分析，結果顯示ＲＡＮＫＬ與??ＲＡＮＫ?相關系數（Ｒ２＝０．５２０７，Ｐ＝０．００１６）?，?Ｐ６２?和?ＲＡＮＫＬ?相關系數（Ｒ２＝０．３４７６，??Ｐ＝０．０１６２），Ｐ６２?和?ＲＡＮＫ?相關系數（Ｒ２＝０．４５７１，Ｐ＝０．００４），提示?Ｐ６２?蛋白、??ＲＡＮＫ蛋白及ＲＡＮＫＬ蛋白三者兩兩之間呈正相關，如圖５：??圖４：?Ｐ６２、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫＬ蛋白三者相關性分析??Ａ?，．５ｌ?Ｂ?１５?Ｃ?２．０－，?？??■?參??


本文編號：3479946