目的研究七氟烷預處理在肝缺血再灌注的作用及其潛在機制是否與Grp78的表達相關(guān)。方法選取雄性大鼠24只,平均重量240±15克,飼養(yǎng)一周后,隨機分為三組:對照假手術(shù)組（Sham組）,模型組（I/R組）,七氟烷組（SEV組）。對照組麻醉后僅進行剖腹及二次剖腹,不進行肝臟缺血再灌注處理,I/R組和SEV組建立大鼠肝臟缺血再灌注模型。SEV組使用七氟烷預先處理,完成手術(shù)后,采集三組大鼠腔靜脈血液樣本,離心獲得上層液。迅速采集肝臟樣本,使用0.9%鹽水與100g肝組織制成10%勻漿。通過酶聯(lián)免疫法測定血清中TNF-α、IL-1β、IL-10和IL-6的濃度。使用檢測盒測定肝均質(zhì)中丙二醛（MDA）,超氧化物異變酶（SOD）和一氧化氮（NO）的含量。使用HE染色、末端標記法和免疫組化等方式觀察細胞損傷程度、細胞凋亡及Grp78的表達。培養(yǎng)小鼠胚胎肝細胞BNLCL.2,在細胞對數(shù)生長階段收集細胞,根據(jù)不同方式分為對照組（Control組）、模型組（I/R組）和七氟烷組（SEV組）。使用糖氧剝奪方式建立了肝細胞缺血再灌注模型,SEV組預先使用七氟烷處理,收集細胞并進行細胞轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染后,對照組細胞分為s... 

【文章來源】：錦州醫(yī)科大學遼寧省

【文章頁數(shù)】：39 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

七氟烷減少肝損害程度，肝細胞凋亡和葡萄糖蛋白78的表達注：A：通過HE染色檢查肝臟損傷程度；B：通過末端標記法檢測細胞凋亡；C：通過免疫法檢測Grp78的表達

圖 2 三組 TNF -α、IL-1β、IL-10 和 IL-6 濃度，MDA,SOD,和 NO 的濃度注：A：通過 ELISA 免疫法檢測 TNF-α、IL-1β、IL-10 和 IL-6 的濃度；B：檢測 MDA、SOD 和 NO。**p<0.01 與假組相比；#p<0.05 或##p<0.01 與 I/R 組相比。三、七氟醚降低缺血再灌注后BNL CL.2細胞凋亡和Grp78的表達，PERK，eIF2α，p-c-JNK/JNK流式細胞儀檢測細胞凋亡表明，與對照組相比，I / R 組細胞凋亡率明顯提高（P<0.01）。雖然 SEV 組的凋亡率仍高于對照組，與 I / R 組相比，凋亡率顯著降低（P<0.01），說明了這一點七氟烷預處理可顯著減少缺血再灌注引起的細胞凋亡（圖 3A）。此外，蛋白質(zhì)印跡分析還顯示，三組細胞中 JNK 的表達沒有明顯差異。然而，與對照組相比 I / R 組中的 Grp78、PERK、eIF2α 和 p-c-JNK 表達顯著升高（P<0.01）。另外，與 I / R 組相比，SEV 組中 Grp78，PERK 的表達，以及 eIF2α 和 p-c-JNK 顯著降低（P<0.01）（圖 3B）。結(jié)果提示七氟烷預處理對 JNK的表達沒有影響，但明顯降低了 Grp78，PERK 的表達，eIF2α 和 p-c-JNK。

圖 3 七氟烷降低缺血再灌注后 BNLCL.2 細胞凋亡和 Grp78 的表達，PERK，eIF2α，p-c-JNK / JNK注：A：流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡；B：Western 檢測 Grp78、PERK、eIF2α、p-c-JNK JNK 表達，蛋白質(zhì)印跡的分子量如下：Grp78，72kda；PERK，125kda；eIF2α，36kda；-c-JNK，46-54kda；JNK，48kda；GAPDH，36kda。**p<0.01 與對照組比較；##p<0.01 I/R 對照組比較。、七氟烷可以通過抑制 Grp78 的表達減少細胞凋亡和 PERK、IF2α 的表達，p-c-JNK / JNK轉(zhuǎn)染后，siGrp78 組 BNLCL.2 細胞中 siGrp78 mRNA 和蛋白表達顯著低于iNC 組（P<0.01）（圖 4A，B）。我們還可以觀察到，對于 siNC 組，I / R + siNC和 I / R + siNC + SEV 組的細胞，I / R + siNC 組凋亡率顯著高于 siNC 組P<0.01）。與 I / R + siNC 相比，I / R + siNC + SEV 組的細胞凋亡率低得多P<0.01）。另外，與 siGrp78 組相比，I / R + siGrp78 組細胞凋亡率顯著增加


本文編號：3470386