目的:1)探討應(yīng)用一種簡(jiǎn)單的方法構(gòu)建人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞（human amniotic mesenchymal stem cells）膜片,并研究其向成軟骨細(xì)胞分化的潛能。2)探索同種異體幼年軟骨微粒移植修復(fù)關(guān)節(jié)軟骨缺損的可行性。3)探索hAMSCs膜片復(fù)合軟骨微粒修復(fù)關(guān)節(jié)骨軟骨缺損的可行性。方法:1)通過機(jī)械—酶消化法獲得hAMSCs,應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)和免疫熒光鑒定第三代細(xì)胞表型;后續(xù)研究采用第三代hAMSCs,體外定向誘導(dǎo)培養(yǎng)14天后,分別使用不同的檢測(cè)方法觀察其成骨、成脂分化的能力;CCK-8法檢測(cè)hAMSCs增殖活性;取第三代hAMSCs分別構(gòu)建hAMSCs膜片和成軟骨誘導(dǎo)的hAMSCs膜片,掃描電鏡（SEM）觀察hAMSCs膜片結(jié)構(gòu)特征和細(xì)胞分布。通過觀察細(xì)胞形態(tài)、甲苯胺藍(lán)染色以及IHC來評(píng)價(jià)成軟骨誘導(dǎo)的hAMSCs膜片細(xì)胞向軟骨細(xì)胞分化潛能;同時(shí)應(yīng)用RT-qPCR和Western blot分析其成軟骨相關(guān)基因（SOX9、COLⅡ、ACAN）和相應(yīng)蛋白的表達(dá)。2)將獲得的幼年貴州小香豬膝關(guān)節(jié)軟骨微粒體外培養(yǎng),分別在1、3、7天進(jìn)行Brdu免疫熒光檢測(cè)。將幼年小香豬膝關(guān)節(jié)軟骨微粒復(fù)... 

【文章來源】：遵義醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察（40×）

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 尤奇2.2 人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞鑒定及純度分析取第三代人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)，結(jié)果顯示：CD44、CD73、CD90、CD105 高表達(dá)，表達(dá)率 99%以上，CD34、CD11B、CD19、CD45、HLA-DR陰性表達(dá)（圖 2）。

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 尤奇2.3 人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞向骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞分化潛能檢測(cè)人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)成骨誘導(dǎo) 14d 后，細(xì)胞體積增大，隨著誘導(dǎo)時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸形成圓形的礦化結(jié)節(jié)，茜素紅染色后可見紅色沉淀。成脂誘導(dǎo) 14d 后，可見細(xì)胞體積增大，胞漿內(nèi)可見空泡樣結(jié)構(gòu)，油紅 O 染色可見紅染的脂滴（圖 3）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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