目的探討中等強度耐力運動對老年小鼠骨骼肌衛(wèi)星細胞數(shù)量和功能的影響,以及AMPK信號介導的自噬在此過程中的作用,為探索肌肉衰減綜合癥的發(fā)病機制和防治方案提供理論依據(jù)。材料與方法將不同鼠齡的小鼠隨機分為青年對照組（YC）、成年對照組（AC）、老年對照組（OC）、老年運動組（OE）,每組各12只。老年運動組小鼠的訓練方案參照Bellafiore的研究,經(jīng)過6周訓練后,采用以下方法進行研究。（1）流式細胞分選技術(shù),分離檢測小鼠骨骼肌靜止衛(wèi)星細胞數(shù)量;免疫熒光染色實驗檢測肌衛(wèi)星細胞標志物Pax7等在分選細胞中的表達,成肌誘導分化培養(yǎng)分選細胞并采用eMHC染色觀察其形成肌管的能力;（2）對分選細胞P-AMPK及自噬相關蛋白LC3A/B,ATG12進行免疫熒光染色,并對其平均熒光強度進行統(tǒng)計分析;（3）Western Blot法檢測C2C12成肌細胞AMPK通路相關蛋白、自噬相關蛋白（ATG12,Beclin1）的表達;透射電鏡觀察C2C12成肌細胞自噬小體形態(tài);（4）注射肌肉毒素（20μl/10μɡ）法建立脛前肌損傷模型,組織學觀察采用HE染色,免疫熒光染色實驗檢測成肌調(diào)節(jié)因子Myod、胚胎肌球蛋... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學重慶市

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

耐力運動對小鼠骨骼肌衰減指數(shù)的影響

重慶醫(yī)科大學研究生學位論文HE 染色結(jié)果顯示: 老年對照組（OC）組小鼠脛前肌肌肉明顯萎縮，主要表現(xiàn)為肌纖維密度減小，相對橫截面積增大(圖 2B)。統(tǒng)計結(jié)果顯示: 老年對照組（OC）小鼠脛前肌肌纖維密度，與青年對照組（YC）相比顯著下降 P<0.01(圖 2D) ，相對橫截面積顯著增大 P<0.01(圖 2E)；老年運動組（OE）肌纖維密度，與老年對照組（OC）相比顯著增高 P<0.01(圖 2D)，相對橫截面積顯著下降 P<0.01(圖 2D)

圖 3 肌衛(wèi)星細胞細胞流式分選策略圖（注：P1 和 P2 是在 FSC /SSC 散點圖中設門圈活細胞群，排除凋亡細胞和碎片；P3 黑框內(nèi)細胞群是表面標記為 CD45-/CD31-/ɑ7-Integrin＋的細胞，P4 黑框內(nèi)的細胞群是在 P3 基礎上選取的表面標記為 Sca-1-/ɑ7-Integrin＋細胞群即靜止肌衛(wèi)星細胞）2.3.2 骨骼肌衛(wèi)星細胞的免疫熒光鑒定Pax7 蛋白為肌衛(wèi)星細胞特有的轉(zhuǎn)錄因子，定位于胞核，是目前用于識別或鑒定靜止衛(wèi)星細胞最可靠的指標。分選的細胞經(jīng)貼壁后行 Pax7 熒光染色同時以 DAPI標記細胞核，Pax7 在細胞核中陽性表達，即分離分選的單核細胞為肌衛(wèi)星細胞，詳見圖 4。中間絲蛋白 Desmin 是肌原性前體細胞標志分子。本研究發(fā)現(xiàn) Desmin 在細胞胞漿中陽性表達，可進一步確認分選出的細胞為肌衛(wèi)星細胞，見圖 4。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]耐力運動促進骨骼肌衛(wèi)星細胞線粒體能量代謝及其對成肌分化的影響[J]. 薄海,王遜,陳啟祥,吉力立,張勇.  中國運動醫(yī)學雜志. 2012(05)
[2]運動性骨骼肌適應的分子機制[J]. 馬繼政.  首都體育學院學報. 2009(02)



本文編號：3463281