研究背景肩袖損傷是目前肩關(guān)節(jié)疼痛并影響正�；顒�(dòng)的主要原因之一。目前對于肩袖損傷治療的最佳方法是進(jìn)行關(guān)節(jié)鏡下手術(shù)修補(bǔ)。但是由于肩袖解剖結(jié)構(gòu)的特殊性,其腱骨界面（bone-tendon junction,BTJ）愈合的情況決定了患者的預(yù)后。目前的研究顯示,外科術(shù)后的腱骨愈合一般是以瘢痕愈合的方式進(jìn)行的,難以達(dá)到肩袖原本的生理結(jié)構(gòu)愈合。這種由瘢痕形成的愈合方式使得肩袖組織的生物力學(xué)強(qiáng)度明顯弱于正常結(jié)構(gòu),成為患者術(shù)后早期進(jìn)行功能鍛煉的障礙,并且可能增加遠(yuǎn)期肩袖發(fā)生再次損傷的概率。LEF1是Wnt通路中重要的轉(zhuǎn)錄因子,是TCF/LEF轉(zhuǎn)錄因子家族中的成員,對Wnt通路調(diào)控細(xì)胞分化有著重要作用,并且能夠影響其他信號(hào)通路。因此,本研究擬1.提取SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（Bone Mesenchymal Stem Cells,BMSCs）,利用慢病毒轉(zhuǎn)染抑制LEF1表達(dá),研究轉(zhuǎn)錄因子LEF1對其誘導(dǎo)向軟骨細(xì)胞分化的作用;2.建立SD大鼠岡上肌腱損傷修復(fù)模型,利用能夠抑制LEF1的慢病毒感染SD大鼠BMSCs,將混有轉(zhuǎn)染后BMSCs的明膠海綿縫入BTJ,觀察術(shù)后腱骨愈合部位的組織變化情況,觀察該轉(zhuǎn)錄因子... 

【文章來源】：中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué)上海市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

種siR入A的抑制效率檢測

感染 48 小時(shí)后采用 RT-PCR 檢測細(xì)胞內(nèi) LEF1 基因的抑制水平。結(jié)果顯示（圖2），慢病毒能夠抑制 LEF1 的表達(dá)，抑制效率約為 64.3%，認(rèn)為符合前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果，將 LEF1 siRNA-1 序列用于下一步的實(shí)驗(yàn)。5、SD 大鼠 BMSCs 轉(zhuǎn)染慢病毒后分化方向檢測在慢病毒轉(zhuǎn)染完成 48 小時(shí)后，消化細(xì)胞并提取細(xì)胞總蛋白及 RNA，利用 Western-Bolt 和 PCR 檢測細(xì)胞內(nèi) Sox9 的表達(dá)情況，并以未轉(zhuǎn)染細(xì)胞進(jìn)行對照。結(jié)果如下（圖3、圖 4），轉(zhuǎn)染后細(xì)胞內(nèi)的 Sox9 的表達(dá)高于未轉(zhuǎn)染的 BMSCs（*p<0.05），表明抑制LEF1 將使 Sox9 的表達(dá)上調(diào)，可使 BMSCs 趨向成軟骨細(xì)胞分化。圖 2 LEF1 siRNA-1 的慢病毒抑制效率驗(yàn)證

感染 48 小時(shí)后采用 RT-PCR 檢測細(xì)胞內(nèi) LEF1 基因的抑制水平。結(jié)果顯示（圖2），慢病毒能夠抑制 LEF1 的表達(dá)，抑制效率約為 64.3%，認(rèn)為符合前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果，將 LEF1 siRNA-1 序列用于下一步的實(shí)驗(yàn)。5、SD 大鼠 BMSCs 轉(zhuǎn)染慢病毒后分化方向檢測在慢病毒轉(zhuǎn)染完成 48 小時(shí)后，消化細(xì)胞并提取細(xì)胞總蛋白及 RNA，利用 Western-Bolt 和 PCR 檢測細(xì)胞內(nèi) Sox9 的表達(dá)情況，并以未轉(zhuǎn)染細(xì)胞進(jìn)行對照。結(jié)果如下（圖3、圖 4），轉(zhuǎn)染后細(xì)胞內(nèi)的 Sox9 的表達(dá)高于未轉(zhuǎn)染的 BMSCs（*p<0.05），表明抑制LEF1 將使 Sox9 的表達(dá)上調(diào)，可使 BMSCs 趨向成軟骨細(xì)胞分化。圖 2 LEF1 siRNA-1 的慢病毒抑制效率驗(yàn)證

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Rotator cuff tears: An evidence based approach[J]. Senthil Nathan Sambandam,Vishesh Khanna,Arif Gul,Varatharaj Mounasamy.  World Journal of Orthopedics. 2015(11)



本文編號(hào)：3417254