目的:探究褪黑素介導(dǎo)的成骨細(xì)胞系hFOB 1.19細(xì)胞凋亡的機(jī)制以及相關(guān)保護(hù)性因素。方法:對(duì)人成骨細(xì)胞系hFOB 1.19進(jìn)行培養(yǎng),應(yīng)用不同濃度的褪黑素對(duì)其作用不同時(shí)間后進(jìn)行流式細(xì)胞檢測(cè)凋亡是否發(fā)生;應(yīng)用不同濃度的褪黑素對(duì)其作用不同時(shí)間后進(jìn)行western blot實(shí)驗(yàn)以檢測(cè)褪黑素受體（MTNR1a、MTNR1b）和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白（GRP78、GRP94）表達(dá)水平,應(yīng)用RT-qPCR和western blotting技術(shù)對(duì)未折疊蛋白反應(yīng)相關(guān)通路蛋白（ATF4、ATF6α、XBP1、p-eIF2α）的mRNA水平和蛋白表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè),對(duì)應(yīng)用不同濃度褪黑素處理相同時(shí)長(zhǎng)的成骨細(xì)胞的POSTN和SEPTIN7的表達(dá)水平進(jìn)行western blot檢測(cè),轉(zhuǎn)染POSTN和SEPTIN7過(guò)表達(dá)質(zhì)粒和小干擾RNA后對(duì)不同處理組的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和凋亡相關(guān)蛋白進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果:不同濃度褪黑素處理組中與對(duì)照組相比早期凋亡細(xì)胞和晚期凋亡細(xì)胞的數(shù)量均有顯著增加,但與2 mM和6 mM褪黑素處理組相比,4 m M褪黑素處理組中晚期凋亡細(xì)胞數(shù)量最少,早期凋亡細(xì)胞數(shù)量最多,說(shuō)明4 mM褪黑素作用24小時(shí)后成骨細(xì)胞hF... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁(yè)數(shù)】：71 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

不同濃度褪黑素作用成骨細(xì)胞不同時(shí)間后MTNR1a，MTNR1b表達(dá)水平的變化

圖 2 不同濃度褪黑素作用不同時(shí)間后內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白 GRP78 和 GRP94 的表達(dá)水平。的數(shù)量來(lái)評(píng)估早起凋亡細(xì)胞的數(shù)量。觀察各組早期凋亡和晚期凋亡的細(xì)胞數(shù)量，結(jié)果顯示各組間相比較，第四象限中細(xì)胞數(shù)量（早期凋亡）有顯著差異，圖 3A（0mM褪黑素作用 24 小時(shí)組）和圖 3B（2mM 褪黑素作用 24 小時(shí)組）與圖 3C（4mM 褪黑素作用 24 小時(shí)組）相比較，早起凋亡細(xì)胞數(shù)顯著減少。同時(shí)圖 3B 和圖 3D 中晚期凋亡細(xì)胞數(shù)較圖 3C 中顯著增加。褪黑素作用 48 小時(shí)后，晚期凋亡細(xì)胞數(shù)量在各濃度褪黑素處理組中與對(duì)照組（0mM 褪黑素處理組）相比均有顯著增加。綜上證實(shí)了高濃度褪黑素可引起成骨細(xì)胞凋亡，同時(shí)我們選擇 4mM 褪黑素作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)的試驗(yàn)條件。

圖 2 不同濃度褪黑素作用不同時(shí)間后內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白 GRP78 和 GRP94 的表達(dá)水平。的數(shù)量來(lái)評(píng)估早起凋亡細(xì)胞的數(shù)量。觀察各組早期凋亡和晚期凋亡的細(xì)胞數(shù)量，結(jié)果顯示各組間相比較，第四象限中細(xì)胞數(shù)量（早期凋亡）有顯著差異，圖 3A（0mM褪黑素作用 24 小時(shí)組）和圖 3B（2mM 褪黑素作用 24 小時(shí)組）與圖 3C（4mM 褪黑素作用 24 小時(shí)組）相比較，早起凋亡細(xì)胞數(shù)顯著減少。同時(shí)圖 3B 和圖 3D 中晚期凋亡細(xì)胞數(shù)較圖 3C 中顯著增加。褪黑素作用 48 小時(shí)后，晚期凋亡細(xì)胞數(shù)量在各濃度褪黑素處理組中與對(duì)照組（0mM 褪黑素處理組）相比均有顯著增加。綜上證實(shí)了高濃度褪黑素可引起成骨細(xì)胞凋亡，同時(shí)我們選擇 4mM 褪黑素作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)的試驗(yàn)條件。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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