目的:探究褪黑素介導的成骨細胞系hFOB 1.19細胞凋亡的機制以及相關(guān)保護性因素。方法:對人成骨細胞系hFOB 1.19進行培養(yǎng),應用不同濃度的褪黑素對其作用不同時間后進行流式細胞檢測凋亡是否發(fā)生;應用不同濃度的褪黑素對其作用不同時間后進行western blot實驗以檢測褪黑素受體（MTNR1a、MTNR1b）和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激相關(guān)蛋白（GRP78、GRP94）表達水平,應用RT-qPCR和western blotting技術(shù)對未折疊蛋白反應相關(guān)通路蛋白（ATF4、ATF6α、XBP1、p-eIF2α）的mRNA水平和蛋白表達水平進行檢測,對應用不同濃度褪黑素處理相同時長的成骨細胞的POSTN和SEPTIN7的表達水平進行western blot檢測,轉(zhuǎn)染POSTN和SEPTIN7過表達質(zhì)粒和小干擾RNA后對不同處理組的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激和凋亡相關(guān)蛋白進行檢測。結(jié)果:不同濃度褪黑素處理組中與對照組相比早期凋亡細胞和晚期凋亡細胞的數(shù)量均有顯著增加,但與2 mM和6 mM褪黑素處理組相比,4 m M褪黑素處理組中晚期凋亡細胞數(shù)量最少,早期凋亡細胞數(shù)量最多,說明4 mM褪黑素作用24小時后成骨細胞hF... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學遼寧省

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

不同濃度褪黑素作用成骨細胞不同時間后MTNR1a，MTNR1b表達水平的變化

圖 2 不同濃度褪黑素作用不同時間后內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激相關(guān)蛋白 GRP78 和 GRP94 的表達水平。的數(shù)量來評估早起凋亡細胞的數(shù)量。觀察各組早期凋亡和晚期凋亡的細胞數(shù)量，結(jié)果顯示各組間相比較，第四象限中細胞數(shù)量（早期凋亡）有顯著差異，圖 3A（0mM褪黑素作用 24 小時組）和圖 3B（2mM 褪黑素作用 24 小時組）與圖 3C（4mM 褪黑素作用 24 小時組）相比較，早起凋亡細胞數(shù)顯著減少。同時圖 3B 和圖 3D 中晚期凋亡細胞數(shù)較圖 3C 中顯著增加。褪黑素作用 48 小時后，晚期凋亡細胞數(shù)量在各濃度褪黑素處理組中與對照組（0mM 褪黑素處理組）相比均有顯著增加。綜上證實了高濃度褪黑素可引起成骨細胞凋亡，同時我們選擇 4mM 褪黑素作為后續(xù)實驗的試驗條件。

圖 2 不同濃度褪黑素作用不同時間后內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激相關(guān)蛋白 GRP78 和 GRP94 的表達水平。的數(shù)量來評估早起凋亡細胞的數(shù)量。觀察各組早期凋亡和晚期凋亡的細胞數(shù)量，結(jié)果顯示各組間相比較，第四象限中細胞數(shù)量（早期凋亡）有顯著差異，圖 3A（0mM褪黑素作用 24 小時組）和圖 3B（2mM 褪黑素作用 24 小時組）與圖 3C（4mM 褪黑素作用 24 小時組）相比較，早起凋亡細胞數(shù)顯著減少。同時圖 3B 和圖 3D 中晚期凋亡細胞數(shù)較圖 3C 中顯著增加。褪黑素作用 48 小時后，晚期凋亡細胞數(shù)量在各濃度褪黑素處理組中與對照組（0mM 褪黑素處理組）相比均有顯著增加。綜上證實了高濃度褪黑素可引起成骨細胞凋亡，同時我們選擇 4mM 褪黑素作為后續(xù)實驗的試驗條件。

【參考文獻】：
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本文編號：3414865