目的:本研究以屬于三陰性乳腺癌（triple negative breast cancer,TNBC）的BT549細(xì)胞株作為研究對(duì)象,探討CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白（CCAAT/enhancer binding protein beta,CEBPB）對(duì)BT549細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力的影響,并初步探尋相關(guān)分子機(jī)制。方法:利用慢病毒構(gòu)建CEBPB基因穩(wěn)定敲低的BT549細(xì)胞株,并通過(guò)Real-time PCR和Western Blot分別在mRNA水平和蛋白質(zhì)水平對(duì)慢病毒的敲低效果進(jìn)行檢測(cè)。CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)敲低CEBPB基因后對(duì)BT549細(xì)胞增殖能力的影響。集落克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)敲低CEBPB基因后對(duì)BT549細(xì)胞集落克隆形成能力的影響。使用EdU試劑盒檢測(cè)敲低CEBPB基因后對(duì)BT549細(xì)胞S期的影響。通過(guò)細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)敲低CEBPB基因后對(duì)BT549細(xì)胞劃痕愈合能力的影響。通過(guò)細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)CEBPB基因敲低后對(duì)BT549細(xì)胞侵襲能力的影響。通過(guò)分析轉(zhuǎn)錄組測(cè)序結(jié)果獲得CEBPB敲低組細(xì)胞和對(duì)照組細(xì)胞的mRNA表達(dá)數(shù)據(jù),研究CEBPB調(diào)控TNBC的分子機(jī)制。結(jié)果:成功構(gòu)建CEBP... 

【文章來(lái)源】：蚌埠醫(yī)學(xué)院安徽省

【文章頁(yè)數(shù)】：61 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

CEBPB基因在TNBC中呈高表達(dá)（A）TNBC與非TNBC中CEBPBmRNA表達(dá)水平的比較

29圖 2 成功構(gòu)建 CEBPB 基因穩(wěn)定敲低的 BT549 細(xì)胞系A(chǔ)）熒光顯微鏡觀察慢病毒的感染效率。B）Real-time PCR 檢測(cè)慢病毒載體感染 BT549 細(xì)胞后 CEBPB mRNA 的C）Western Blot 檢測(cè)慢病毒載體感染 BT549 細(xì)胞后 CEBPB 蛋白的相對(duì)**P<0.001，t 檢驗(yàn)。

PB 基因敲低對(duì) BT549 細(xì)胞增殖、集落克隆形成和周期的1 中的結(jié)果提示 CEBPB 與 TNBC 之間存在著密切聯(lián)系，我們通過(guò)落克隆形成實(shí)驗(yàn)和 EdU 實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了在敲低 BT549 細(xì)胞中 CEBP BT549 細(xì)胞增殖方面的影響。圖 3 中 CCK-8 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示 CE細(xì)胞活力明顯低于陰性對(duì)照組的細(xì)胞活力。圖 4 中集落克隆形成CEBPB 基因敲低組的 BT549 細(xì)胞形成更少、更小的集落。此外，示，敲低 CEBPB 基因的表達(dá)導(dǎo)致位于 S 期的細(xì)胞數(shù)目比例減少見圖 5A 和圖 5B。這些結(jié)果表明，CEBPB 基因能夠促進(jìn) BT549周期的進(jìn)行。


本文編號(hào)：3413149