發(fā)布時間：2021-09-29 03:54

　　目的:本研究以屬于三陰性乳腺癌（triple negative breast cancer,TNBC）的BT549細(xì)胞株作為研究對象,探討CCAAT/增強子結(jié)合蛋白（CCAAT/enhancer binding protein beta,CEBPB）對BT549細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力的影響,并初步探尋相關(guān)分子機制。方法:利用慢病毒構(gòu)建CEBPB基因穩(wěn)定敲低的BT549細(xì)胞株,并通過Real-time PCR和Western Blot分別在mRNA水平和蛋白質(zhì)水平對慢病毒的敲低效果進(jìn)行檢測。CCK-8實驗檢測敲低CEBPB基因后對BT549細(xì)胞增殖能力的影響。集落克隆形成實驗檢測敲低CEBPB基因后對BT549細(xì)胞集落克隆形成能力的影響。使用EdU試劑盒檢測敲低CEBPB基因后對BT549細(xì)胞S期的影響。通過細(xì)胞劃痕實驗檢測敲低CEBPB基因后對BT549細(xì)胞劃痕愈合能力的影響。通過細(xì)胞侵襲實驗檢測CEBPB基因敲低后對BT549細(xì)胞侵襲能力的影響。通過分析轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果獲得CEBPB敲低組細(xì)胞和對照組細(xì)胞的mRNA表達(dá)數(shù)據(jù),研究CEBPB調(diào)控TNBC的分子機制。結(jié)果:成功構(gòu)建CEBP... 

【文章來源】：蚌埠醫(yī)學(xué)院安徽省

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

CEBPB基因在TNBC中呈高表達(dá)（A）TNBC與非TNBC中CEBPBmRNA表達(dá)水平的比較

29圖 2 成功構(gòu)建 CEBPB 基因穩(wěn)定敲低的 BT549 細(xì)胞系A(chǔ)）熒光顯微鏡觀察慢病毒的感染效率。B）Real-time PCR 檢測慢病毒載體感染 BT549 細(xì)胞后 CEBPB mRNA 的C）Western Blot 檢測慢病毒載體感染 BT549 細(xì)胞后 CEBPB 蛋白的相對**P<0.001，t 檢驗。

PB 基因敲低對 BT549 細(xì)胞增殖、集落克隆形成和周期的1 中的結(jié)果提示 CEBPB 與 TNBC 之間存在著密切聯(lián)系，我們通過落克隆形成實驗和 EdU 實驗檢測了在敲低 BT549 細(xì)胞中 CEBP BT549 細(xì)胞增殖方面的影響。圖 3 中 CCK-8 實驗結(jié)果顯示 CE細(xì)胞活力明顯低于陰性對照組的細(xì)胞活力。圖 4 中集落克隆形成CEBPB 基因敲低組的 BT549 細(xì)胞形成更少、更小的集落。此外，示，敲低 CEBPB 基因的表達(dá)導(dǎo)致位于 S 期的細(xì)胞數(shù)目比例減少見圖 5A 和圖 5B。這些結(jié)果表明，CEBPB 基因能夠促進(jìn) BT549周期的進(jìn)行。


本文編號：3413149