目的:骨關(guān)節(jié)炎是一種常見(jiàn)的年齡相關(guān)的慢性關(guān)節(jié)疾病,影響著相當(dāng)數(shù)量的中老年人。主要表現(xiàn)為嚴(yán)重的疼痛和活動(dòng)障礙,發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,治療手段有限,造成的患者生活質(zhì)量下降以及其帶來(lái)的社會(huì)經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)難以估量。目前隨著我國(guó)人口老齡化加劇,以及人們對(duì)生活質(zhì)量的要求不斷提高,骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)病率和就診率越來(lái)越高,在目前的研究基礎(chǔ)上進(jìn)一步探討其發(fā)病機(jī)制,尋求經(jīng)濟(jì)有效的治療手段具有重要意義。軟骨細(xì)胞自我再生及修復(fù)能力較差,因此維持軟骨細(xì)胞的自穩(wěn)態(tài)在關(guān)節(jié)退化,骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)病過(guò)程中有關(guān)鍵性的作用。自噬作為真核細(xì)胞中重要的細(xì)胞穩(wěn)態(tài)機(jī)制發(fā)揮重要作用。目前骨關(guān)節(jié)炎與自噬的研究停留在非選擇性自噬上。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的BAG3介導(dǎo)的協(xié)同分子伴侶的選擇性自噬（Chaperone-assisted selective autophagy,CASA）是一種新型的選擇性自噬通路,主要作用是識(shí)別錯(cuò)誤折疊的蛋白質(zhì)并將其降解再利用,已被證明在很多疾病中起關(guān)鍵作用。適度運(yùn)動(dòng)治療骨關(guān)節(jié)炎已被大量文獻(xiàn)證明了,但其中的分子機(jī)制尚不完全清除,探索CASA在軟骨細(xì)胞中的表達(dá)變化以及在骨關(guān)節(jié)炎模型及運(yùn)動(dòng)干預(yù)作用下的變化規(guī)律,有利于我們進(jìn)一步了解骨關(guān)節(jié)炎發(fā)病機(jī)制及... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)遼寧省

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

大鼠原代軟骨細(xì)胞形態(tài)與II型膠原免疫染色（A）長(zhǎng)滿培養(yǎng)瓶的大鼠原代軟骨細(xì)胞

14圖 1.2 II 型膠原和 ADAMTS5 的免疫熒光染色（A，B）圖片放大倍數(shù) 40X。3.3 不同濃度 MIA 不同干預(yù)時(shí)間對(duì)大鼠原代軟骨細(xì)胞 CASA 通路相關(guān)蛋白的影響

中國(guó)醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文3.3.1 CCK8 檢測(cè)不同干預(yù)條件下細(xì)胞活性變化增強(qiáng)型 CCK8 試劑盒是基于 WST-8 的應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速、高靈敏度檢測(cè)試劑盒。WST-8 是一種類似于 MTT 的化合物，在電子耦合劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成橙黃色 formazan。細(xì)胞增殖越多越快，則顏色越深，細(xì)胞毒性越大則顏色越淺，對(duì)于同樣的細(xì)胞，顏色深淺和細(xì)胞數(shù)目呈線性關(guān)系。將細(xì)胞加入一定濃度 MIA 干預(yù)一定時(shí)間后，從培養(yǎng)箱取出，加入 CCK8 試劑，繼續(xù)孵育一段時(shí)間后于酶標(biāo)儀上測(cè)定 450nm 吸光度值（可在不同時(shí)間用酶標(biāo)儀反復(fù)讀板，找到最佳讀板時(shí)間點(diǎn)）。我們最終使用了終濃度為 1uM 和 20uM 的 MIA，干預(yù)時(shí)間分別為 24h 和 1h。分組為對(duì)照組，MIA1 組（短時(shí)干預(yù)組）和 MIA2 組（長(zhǎng)時(shí)干預(yù)組）。CCK8 結(jié)果顯示在此干預(yù)條件下細(xì)胞活性大致在 70%，如圖 1.3。


本文編號(hào)：3411441