研究背景骨關(guān)節(jié)炎（Osteoarthritis,OA）是一種最常見的慢性退行性病變,可累及全身多個(gè)關(guān)節(jié),好發(fā)在膝關(guān)節(jié),常伴有關(guān)節(jié)疼痛、活動(dòng)度減小、關(guān)節(jié)畸形攣縮等癥狀。OA一直以來(lái)都是研究的熱點(diǎn),但目前仍沒有找到有效的靶點(diǎn)進(jìn)行治療。目前有大量的研究表明BMP5與OA相關(guān),但其是否在OA的疾病發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮作用仍值得探討。研究目的本研究旨在明確BMP5在OA關(guān)節(jié)軟骨組織中表達(dá)情況,進(jìn)而探究BMP5蛋白在OA中對(duì)軟骨細(xì)胞功能的影響,研究BMP5與骨關(guān)節(jié)炎中關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞出現(xiàn)衰老和凋亡之間的關(guān)系,深入探討B(tài)MP5與ERK/p38 MAPK信號(hào)通路在骨關(guān)節(jié)炎病程中的作用及其分子機(jī)制,為防治骨關(guān)節(jié)炎提供新的潛在靶點(diǎn)。研究方法本研究在臨床上收集OA患者關(guān)節(jié)軟骨標(biāo)本和正常關(guān)節(jié)軟骨標(biāo)本、關(guān)節(jié)液,通過(guò)免疫組化、western blot、ELISA實(shí)驗(yàn)檢測(cè)BMP5的表達(dá)情況。同時(shí)利用c57/BL6小鼠構(gòu)建DMM-OA骨關(guān)節(jié)炎模型、年老模型,通過(guò)IHC檢測(cè)BMP5在造模術(shù)后2、4周膝關(guān)節(jié)軟骨中的表達(dá)情況。利用ATDC5細(xì)胞進(jìn)行體外siRNA轉(zhuǎn)染,敲除BMP5,并利用熒光實(shí)時(shí)定量（RT-qPCR）和weste... 

【文章來(lái)源】：南方醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁(yè)數(shù)】：99 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１－１正常膝關(guān)節(jié)示意圖??

＾?丨?ｃａｌｃｉｆｉｅｄ?ｃａｒｔｉｌａｇｅ??ａｔｔｒｉｔｉｏｎ?Ｖ?／?／?ｋ?一，??Ｃｙｓｔ－ｒｒ?／＞．??＼?＼?／?／?；?Ｍ?ｃａｎｎａｌｉｃｕｌａｒ?ｎｅｔｗｏｒｋ??＼?１?ｆ?／?Ｃｈｏｎｄｒｏｃｙｔｅ?Ａｐｏｐｔｏｔｉｃ?ｏｓｔｅｏｃｙｔｅ??ｒ?１?＇?ｃｌｕｓｔｅｒ??」?Ａｐｏｐｔｏｔｉｃ??ｈｙｐ；：／?Ｃｈ°ｎｄ；。�。�??Ｎｅｗ?ｂｏｎｅ?ｆｏｒｍａｔｉｏｎ?ａｔ?ｔｈｅ??ｏｓｔｅｏｃｈｏｎｄｒａｌ?ｊｕｎｃｔｉｏｎ??圖１－３晚期骨關(guān)節(jié)炎結(jié)構(gòu)??Ｆｉｇｕｒｅ?１－３?Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｋｎｅｅ?ｊｏｉｎｔ?ｉｎ?ｌａｔｅ－ｓｔａｇｅ?ＯＡ??３??

第二章ＢＭＰ５通過(guò)促進(jìn)軟骨細(xì)胞衰老和凋亡加速骨關(guān)節(jié)炎病程進(jìn)展??、’氣??圖２－１臨床ＯＡ標(biāo)本收集７Ｆ：意圖。??左圖為取下來(lái)的膝骨關(guān)節(jié)炎標(biāo)本；右圖中打孔為膝骨關(guān)節(jié)炎標(biāo)本取材位置。??２．２．１．４實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與飼養(yǎng)??ＯＡ模型構(gòu)建、繁殖使用Ｃ５７ＢＬ／６小鼠均購(gòu)自南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。??按照規(guī)定的清潔級(jí)的級(jí)別對(duì)小鼠進(jìn)行飼養(yǎng)管理，每籠３只小鼠，更換墊料并添加??大小動(dòng)物維持飼料及飲水，每三天進(jìn)行一次。當(dāng)小鼠１０周齡的時(shí)候認(rèn)為小鼠己??經(jīng)成年，可行手術(shù)干預(yù)。??２．２．２實(shí)驗(yàn)方法??２．２．２．１小鼠原代肋軟骨細(xì)胞提取??選取新出生ｌ－３ｄ的乳鼠，即皮膚還未變黑的乳鼠即可進(jìn)行取原代。為了避??免細(xì)胞出現(xiàn)污染，我們首先將乳鼠放置７５％中的酒精進(jìn)行消毒１０分鐘。接著，??將消毒后的乳鼠置于無(wú)菌超凈臺(tái)中泡沫板上，用無(wú)菌ｌｍｌ針頭固定乳鼠，使用高??壓過(guò)的眼科剪和眼科鑷分離乳鼠背部的皮膚，注意避免觸及乳鼠的肺部和腹腔。??當(dāng)完全分離幵乳鼠背部的皮膚時(shí)，暴露出乳鼠胸廓，用眼科鑷離斷頸部以及脊柱，??再用鑷子和剪刀小心分離出肋軟骨。將取下來(lái)的肋軟骨置于基礎(chǔ)培養(yǎng)基中培養(yǎng)??ｌＯｍｉｎ。然后在體式顯微鏡下觀察，利用顯微剪和顯微鑷前面取下來(lái)浸泡在基礎(chǔ)??培養(yǎng)基中的軟骨進(jìn)行粗分（分離軟骨和其他顯微組織）。最后進(jìn)行軟骨消化，將??粗分后的軟骨組織放０．２５％胰酶中，此步能夠?qū)⒏街谲浌堑睦w維組織分離。３７°Ｃ??細(xì)胞消化３０ｍｍ后，再次于體式顯微鏡下分離肋軟骨上附著的肌肉及纖維組織??進(jìn)行精分，直至可見肋軟骨不見其他附著物。??將精分后的軟骨組織，放入裝有０．１％膠原酶ＩＩ的ＤＭＥＭ／Ｆ１２的培養(yǎng)集中，??３６??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Osteocyte dysfunction promotes osteoarthritis through MMP13-dependent suppression of subchondral bone homeostasis[J]. Courtney M.Mazur,Jonathon J.Woo,Cristal S.Yee,Aaron J.Fields,Claire Acevedo,Karsyn N.Bailey,Serra Kaya,Tristan W.Fowler,Jeffrey C. Lotz,Alexis Dang,Alfred C. Kuo,Thomas P. Vail,Tamara Alliston.  Bone Research. 2019(04)
[2]Activation of mTORC1 in subchondral bone preosteoblasts promotes osteoarthritis by stimulating bone sclerosis and secretion of CXCL12[J]. Chuangxin Lin,Liangliang Liu,Chun Zeng,Zhong-Kai Cui,Yuhui Chen,Pinling Lai,Hong Wang,Yan Shao,Haiyan Zhang,Rongkai Zhang,Chang Zhao,Hang Fang,Daozhang Cai,Xiaochun Bai.  Bone Research. 2019(01)
[3]The biological function of type I receptors of bone morphogenetic protein in bone[J]. Shuxian Lin,Kathy KH Svoboda,Jian Q Feng,Xinquan Jiang.  Bone Research. 2016(02)



本文編號(hào)：3406053