研究背景骨關節(jié)炎（Osteoarthritis,OA）是一種最常見的慢性退行性病變,可累及全身多個關節(jié),好發(fā)在膝關節(jié),常伴有關節(jié)疼痛、活動度減小、關節(jié)畸形攣縮等癥狀。OA一直以來都是研究的熱點,但目前仍沒有找到有效的靶點進行治療。目前有大量的研究表明BMP5與OA相關,但其是否在OA的疾病發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮作用仍值得探討。研究目的本研究旨在明確BMP5在OA關節(jié)軟骨組織中表達情況,進而探究BMP5蛋白在OA中對軟骨細胞功能的影響,研究BMP5與骨關節(jié)炎中關節(jié)軟骨細胞出現(xiàn)衰老和凋亡之間的關系,深入探討B(tài)MP5與ERK/p38 MAPK信號通路在骨關節(jié)炎病程中的作用及其分子機制,為防治骨關節(jié)炎提供新的潛在靶點。研究方法本研究在臨床上收集OA患者關節(jié)軟骨標本和正常關節(jié)軟骨標本、關節(jié)液,通過免疫組化、western blot、ELISA實驗檢測BMP5的表達情況。同時利用c57/BL6小鼠構建DMM-OA骨關節(jié)炎模型、年老模型,通過IHC檢測BMP5在造模術后2、4周膝關節(jié)軟骨中的表達情況。利用ATDC5細胞進行體外siRNA轉染,敲除BMP5,并利用熒光實時定量（RT-qPCR）和weste... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學廣東省

【文章頁數】：99 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１－１正常膝關節(jié)示意圖??

＾?丨?ｃａｌｃｉｆｉｅｄ?ｃａｒｔｉｌａｇｅ??ａｔｔｒｉｔｉｏｎ?Ｖ?／?／?ｋ?一，??Ｃｙｓｔ－ｒｒ?／＞．??＼?＼?／?／?；?Ｍ?ｃａｎｎａｌｉｃｕｌａｒ?ｎｅｔｗｏｒｋ??＼?１?ｆ?／?Ｃｈｏｎｄｒｏｃｙｔｅ?Ａｐｏｐｔｏｔｉｃ?ｏｓｔｅｏｃｙｔｅ??ｒ?１?＇?ｃｌｕｓｔｅｒ??」?Ａｐｏｐｔｏｔｉｃ??ｈｙｐ；：／?Ｃｈ°ｎｄ；。�。�??Ｎｅｗ?ｂｏｎｅ?ｆｏｒｍａｔｉｏｎ?ａｔ?ｔｈｅ??ｏｓｔｅｏｃｈｏｎｄｒａｌ?ｊｕｎｃｔｉｏｎ??圖１－３晚期骨關節(jié)炎結構??Ｆｉｇｕｒｅ?１－３?Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｋｎｅｅ?ｊｏｉｎｔ?ｉｎ?ｌａｔｅ－ｓｔａｇｅ?ＯＡ??３??

第二章ＢＭＰ５通過促進軟骨細胞衰老和凋亡加速骨關節(jié)炎病程進展??、’氣??圖２－１臨床ＯＡ標本收集７Ｆ：意圖。??左圖為取下來的膝骨關節(jié)炎標本；右圖中打孔為膝骨關節(jié)炎標本取材位置。??２．２．１．４實驗動物與飼養(yǎng)??ＯＡ模型構建、繁殖使用Ｃ５７ＢＬ／６小鼠均購自南方醫(yī)科大學實驗動物中心。??按照規(guī)定的清潔級的級別對小鼠進行飼養(yǎng)管理，每籠３只小鼠，更換墊料并添加??大小動物維持飼料及飲水，每三天進行一次。當小鼠１０周齡的時候認為小鼠己??經成年，可行手術干預。??２．２．２實驗方法??２．２．２．１小鼠原代肋軟骨細胞提取??選取新出生ｌ－３ｄ的乳鼠，即皮膚還未變黑的乳鼠即可進行取原代。為了避??免細胞出現(xiàn)污染，我們首先將乳鼠放置７５％中的酒精進行消毒１０分鐘。接著，??將消毒后的乳鼠置于無菌超凈臺中泡沫板上，用無菌ｌｍｌ針頭固定乳鼠，使用高??壓過的眼科剪和眼科鑷分離乳鼠背部的皮膚，注意避免觸及乳鼠的肺部和腹腔。??當完全分離幵乳鼠背部的皮膚時，暴露出乳鼠胸廓，用眼科鑷離斷頸部以及脊柱，??再用鑷子和剪刀小心分離出肋軟骨。將取下來的肋軟骨置于基礎培養(yǎng)基中培養(yǎng)??ｌＯｍｉｎ。然后在體式顯微鏡下觀察，利用顯微剪和顯微鑷前面取下來浸泡在基礎??培養(yǎng)基中的軟骨進行粗分（分離軟骨和其他顯微組織）。最后進行軟骨消化，將??粗分后的軟骨組織放０．２５％胰酶中，此步能夠將附著在軟骨的纖維組織分離。３７°Ｃ??細胞消化３０ｍｍ后，再次于體式顯微鏡下分離肋軟骨上附著的肌肉及纖維組織??進行精分，直至可見肋軟骨不見其他附著物。??將精分后的軟骨組織，放入裝有０．１％膠原酶ＩＩ的ＤＭＥＭ／Ｆ１２的培養(yǎng)集中，??３６??

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Osteocyte dysfunction promotes osteoarthritis through MMP13-dependent suppression of subchondral bone homeostasis[J]. Courtney M.Mazur,Jonathon J.Woo,Cristal S.Yee,Aaron J.Fields,Claire Acevedo,Karsyn N.Bailey,Serra Kaya,Tristan W.Fowler,Jeffrey C. Lotz,Alexis Dang,Alfred C. Kuo,Thomas P. Vail,Tamara Alliston.  Bone Research. 2019(04)
[2]Activation of mTORC1 in subchondral bone preosteoblasts promotes osteoarthritis by stimulating bone sclerosis and secretion of CXCL12[J]. Chuangxin Lin,Liangliang Liu,Chun Zeng,Zhong-Kai Cui,Yuhui Chen,Pinling Lai,Hong Wang,Yan Shao,Haiyan Zhang,Rongkai Zhang,Chang Zhao,Hang Fang,Daozhang Cai,Xiaochun Bai.  Bone Research. 2019(01)
[3]The biological function of type I receptors of bone morphogenetic protein in bone[J]. Shuxian Lin,Kathy KH Svoboda,Jian Q Feng,Xinquan Jiang.  Bone Research. 2016(02)



本文編號：3406053