目的:缺氧/復(fù)氧（hypoxia/reoxygenation,H/R）在骨關(guān)節(jié)炎（osteoarthritis,OA）的病理發(fā)生機(jī)制中起著重要作用。成纖維樣滑膜細(xì)胞對(duì)H/R刺激高度敏感,被認(rèn)為參與OA進(jìn)展過程中的軟骨降解。本研究主要檢測(cè)H/R對(duì)滑膜細(xì)胞胰島素樣生長(zhǎng)因子（insulin-like growth factor,IGF）系統(tǒng)以及炎性介質(zhì)的效應(yīng)。方法:分離培養(yǎng)正常原代滑膜細(xì)胞并進(jìn)行免疫熒光鑒定;H/R模型的建立:輪流將細(xì)胞培養(yǎng)皿置于缺氧條件（1%O₂）2 h,常規(guī)培養(yǎng)條件2 h,重復(fù)進(jìn)行3個(gè)循環(huán)。收集細(xì)胞培養(yǎng)上清液,血?dú)夥治鰞x監(jiān)測(cè)培養(yǎng)條件氧分壓。酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液趨化因子CCL-5、IL-1β和IL-6的水平;實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）檢測(cè)滑膜細(xì)胞中IGF-1、IGFBP-3的mRNA表達(dá)水平;Western Blot檢測(cè)滑膜細(xì)胞中IGF-1、IGFBP-3、COX-2、ADAMTS-5、MMP-13、INOS、P-P65、P65、P-IκB和IκB的蛋白表達(dá)水平;流式細(xì)胞儀檢測(cè)滑膜細(xì)胞內(nèi)活性氧（reactive ... 

【文章來源】：武漢大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：43 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

原代成纖維樣滑膜細(xì)胞從滑膜組織分離培養(yǎng)的成纖維樣滑膜細(xì)胞

傳代成纖維樣滑膜細(xì)胞（A）為第一代滑膜細(xì)胞；（B）為第二代滑膜細(xì)胞；（C）為第三代滑膜細(xì)胞

成纖維樣滑膜細(xì)胞免疫熒光鑒定（A）為成纖維樣滑膜細(xì)胞Vimentin陽性；（B）為成纖維樣滑膜細(xì)胞CD90/Thy-1陽性，細(xì)胞核為藍(lán)色(100

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]成纖維樣滑膜細(xì)胞原代培養(yǎng)及其在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎治療機(jī)制研究中的應(yīng)用進(jìn)展[J]. 汪永忠,鄧龍飛,韓燕全,姜輝,李鈺馨,夏倫祝.  中國藥房. 2016(07)
[2]新生大鼠成骨細(xì)胞原代培養(yǎng)與鑒定[J]. 程浩,張延芳,許巍.  中國組織工程研究. 2013(41)
[3]大鼠膝骨關(guān)節(jié)炎滑膜細(xì)胞原代培養(yǎng)[J]. 袁琴,闞衛(wèi)兵,宋朋飛,張隆,王擁軍.  現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2012(02)
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[5]滑膜細(xì)胞原代體外培養(yǎng)體系的建立[J]. 陳相,孫晉民,李繼光,賈蘭玲.  醫(yī)學(xué)理論與實(shí)踐. 2009(09)
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本文編號(hào)：3401401