目的研究“核HO-1”是否降低缺氧損傷后的體外血脊髓屏障的通透性。方法培養(yǎng)人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞（HCMEC/D3）和人脊髓星型膠質(zhì)細(xì)胞（HA-sc）,并將HO-1C?23質(zhì)粒和空載質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染到HCMEC/D3中,轉(zhuǎn)染HO-1C?23三天后,提取轉(zhuǎn)染HO-1C?23和空白對照HCMEC/D3細(xì)胞核和細(xì)胞漿蛋白,western檢測細(xì)胞核和細(xì)胞漿中血紅素氧合酶1（Heme Oxygenase 1,HO-1）蛋白表達量,HCMEC/D3細(xì)胞與HA-sc細(xì)胞利用Transwell小室構(gòu)建體外血脊髓屏障,分為HO-1C?23組、空載組、空白對照組,分別給予終濃度為150μM氯化鈷缺氧誘導(dǎo)24h處理,western技術(shù)檢測微囊蛋白1（caveolin-1,CAV-1）、微囊蛋白2（caveolin-2,CAV-2）、ZO-1、occludin蛋白表達,免疫熒光技術(shù)檢測CAV-1、CAV-2、ZO-1、occludin分布情況,HRP檢測血脊髓屏障通透性。結(jié)果轉(zhuǎn)染HO-1C?23較空白對照HCMEC/D3細(xì)胞核HO-1蛋白表達量明顯增高（P<0.05）,而細(xì)胞漿HO-1表達量無明顯差異（P>... 

【文章來源】：錦州醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：36 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

各組細(xì)胞漿HO-1表達情況

圖 4 各組 CAV-2 表達情況圖注：各組 CAV-2 相對表達量與空載組比較，HO-1CΔ23 組 CAV-1 相對表達量明顯減少＃P＜0.05，與空白對組比較，HO-1CΔ23 組 CAV-2 相對表達量明顯減少＃P＜0.05，與空載組比較，空白對照組 CAV-2 相對表達量無明顯差異＃＃P>0.05。三、各組 CAV-1、CAV-2 蛋白免疫熒光分布情況在 western 結(jié)果下，我們進一步運用免疫熒光技術(shù)，檢測各組 CAV-1、CAV-2、蛋白分布情況，從免疫熒光結(jié)果看，各組 CAV-1、CAV-2 蛋白主要在細(xì)胞膜表達，并且 HO-1C 23 組 CAV-1 和 CAV-2 表達較空載組和空白對照組相比減少，這與脊髓微血管內(nèi)皮細(xì)胞有致密的細(xì)胞間連接，缺乏窗孔和吞飲小泡[14]結(jié)論相一致。（見圖 5，圖 6）HO-1C 23組空空組空空空空組0.0組組

圖 6 各組 CAV-2 分布情況（熒光顯微鏡 x20）四、Western 檢測 ZO-1、Occludin 蛋白表達情況為確定“核 HO-1”是否通過細(xì)胞旁途徑降低血脊髓屏障通透性，我們運用Western 檢測各組緊密連接蛋白 Z0-1、occludin 蛋白表達情況，結(jié)果顯示：經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，HO-1C 23 組與空載及空白對照組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（＃P＜0.05），而空載組與空白對照組相比差別無統(tǒng)計學(xué)意義（＃＃P>0.05）。與空載組及空白對照比較，HO-1C 23 組 ZO-1、occludin 蛋白表達明顯增加，空載組與空白對照組比較 ZO-1、Occludin 蛋白表達無明顯差異。（見圖 7）

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3387593