目的:探究HDAC9與SONFH的關(guān)系,明確下調(diào)的HDAC9對SONFH病人來源的BMSCs成骨、成血管及成脂分化能力的影響,為BMSCs治療SONFH提供新的思路與方法。方法:（1）分離、培養(yǎng)、鑒定SONFH和非SONFH患者來源的BMSCs。（2）用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測兩組細胞HDAC9的m RNA表達。（3）應(yīng)用慢病毒轉(zhuǎn)染BMSCs,下調(diào)SONFH來源BMSCs的HDAC9表達,誘導BMSCs成骨、成血管、成脂分化,分別應(yīng)用茜素紅染色、血管形成實驗以及油紅O染色,檢測其成骨、成血管及成脂分化能力,分別檢測成骨相關(guān)蛋白Runx2、OCN;成血管相關(guān)蛋白PDGF-BB、CD31;成脂相關(guān)蛋白PPAR-γ含量表達。結(jié)果:（1）成功分離、培養(yǎng)BMSCs,細胞貼壁生長并呈長梭形,平行或漩渦狀排列聚集,細胞表面分子標記CD29、CD44高表達,CD34、HLA-DR低表達。（2）與非SONFH來源的BMSCs相比,SONFH來源的BMSCs HDAC9 m RNA表達顯著降低,差異具有統(tǒng)計學意義（p<0.05）。（3）采用慢病毒轉(zhuǎn)染HDAC9進入SONFH來源的BMSCs后,測得... 

【文章來源】：華中科技大學湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

SONFH患者來源BMSCs與非SONFH患者來源BMSCs中HDAC9mRNA水平分析

圖 3.轉(zhuǎn)染 48 小時后 BMSCs 細胞熒光。5. QRT-PCR 及 Western blot 驗證 HDAC9 的表達利用 QRT-PCR 技術(shù)檢測轉(zhuǎn)染后各組細胞的 HDAC9 表達情況，其結(jié)果顯示，慢病毒干擾轉(zhuǎn)染組（Lenti-HDAC9 group）HDAC9 的 mRNA 表達明顯下調(diào)，顯著低于空白組（Control group）及慢病毒空載組（Mock-treated group），差異具有統(tǒng)計學意義（p＜0.05），而空白組與慢病毒空載組無明顯差異（p＞0.05）（圖 4-A）。利用 Western blot 技術(shù)檢測轉(zhuǎn)染后各組細胞 HDAC9 的蛋白表達情況，其結(jié)果表明，慢病毒干擾轉(zhuǎn)染組 HDAC9 的蛋白含量顯著低于空白組及慢病毒空載組，差異具有統(tǒng)計學意義（p＜0.05），而空白組與慢病毒空載組無明顯差異（p＞0.05）（圖 4-B）。以上結(jié)果表明，通過慢病毒轉(zhuǎn)染 BMSCs 干預 HDAC9 的表達獲得成功。

19圖 4. A.病毒轉(zhuǎn)染后三組細胞 HDAC9 mRNA 表達。B.病毒轉(zhuǎn)染后三組細胞 HDAC9蛋白含量。*表示統(tǒng)計學上具有顯著差異（p＜0.05）。6. MTT 檢測 HDAC9 干擾對 BMSCs 的增殖能力影響利用 MTT 技術(shù)檢測轉(zhuǎn)染后各組細胞的增殖能力，通過計算不同時間點的吸光度值，發(fā)現(xiàn)在不同時間點三組細胞的增殖率均無顯著差異（p＞0.05）（圖 5）。

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
[1]MiR-708通過靶基因SMAD3抑制間充質(zhì)干細胞成骨分化并促進激素性股骨頭壞死[D]. 郝鋮.華中科技大學 2016
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