研究背景骨關(guān)節(jié)炎（Osteoarthritis,OA）是一種常見的以軟骨退變、滑膜炎、軟骨下骨硬化、關(guān)節(jié)囊肥大為特征的慢性退行性疾病,在老齡化不斷加劇的社會背景下,其發(fā)病率逐年攀升,嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量,給家庭及社會帶來了沉重的經(jīng)濟負(fù)擔(dān)。過去常常認(rèn)為OA的發(fā)生僅僅是由關(guān)節(jié)磨損所引起,但越來越多的研究表明炎癥在其發(fā)病機理中起著至關(guān)重要的作用。文獻(xiàn)報道,IL-1β（interleukin-1β）、IL-6（interleukin-6）、TNF-α（tumor necrosis factor-α）等促炎細(xì)胞因子在骨關(guān)節(jié)炎患者軟骨組織內(nèi)表達(dá)升高,血液中CRP（C-reactionprotein）濃度高的患者疾病進(jìn)展速度較濃度低的患者快。持續(xù)存在的炎癥因子能夠刺激軟骨細(xì)胞產(chǎn)生MMP-1（matrix metalloproteinase-1）,MMP-3,MMP-13和其他基質(zhì)分解代謝酶,導(dǎo)致軟骨細(xì)胞合成與分解代謝失衡。多巴胺（Dopamine,DA）是一種重要的神經(jīng)遞質(zhì),具有控制運動、情緒、認(rèn)知和內(nèi)分泌等功能。最近研究表明DA還具有很強的抗炎、抗氧化能力,能夠通過抑制NF-κB信號通路下調(diào)IL-... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

人軟骨細(xì)胞鑒定

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文29胞質(zhì)呈綠色，細(xì)胞核呈深藍(lán)色。比例尺=50μm。3.2DA對軟骨細(xì)胞的毒性效應(yīng)CCK-8法探究DA對軟骨細(xì)胞的毒性效應(yīng)，篩選DA在軟骨細(xì)胞中的治療濃度。該方法實驗原理為WST-8在電子耦合試劑存在的情況下能夠被線粒體內(nèi)的脫氫酶還原成橙黃色的甲瓚產(chǎn)物（Formazan）。通常認(rèn)為在同一種細(xì)胞內(nèi)，顏色深淺與活細(xì)胞數(shù)量成正比。結(jié)果顯示，低濃度區(qū)間的DA（0-100μM）無論是對C28/I2軟骨細(xì)胞（圖2A）還是對人軟骨細(xì)胞（圖2B）均未表現(xiàn)出明顯的毒性效應(yīng)，但是高濃度的DA（≥200μM）則對軟骨細(xì)胞活性產(chǎn)生較強抑制作用。鑒于此，選擇25μM、50μM、100μM三組濃度用于后續(xù)實驗研究。圖2DA對軟骨細(xì)胞的毒性效應(yīng)。不同濃度DA與軟骨細(xì)胞共同孵育24h，通過CCK-8法分析DA對軟骨細(xì)胞的毒性效應(yīng)。（A）C28/I2軟骨細(xì)胞；（B）人軟骨細(xì)胞。數(shù)據(jù)表示為均值±標(biāo)準(zhǔn)差，#P<0.05VS對照組。3.3DA遏制IL-1β引起的軟骨細(xì)胞GAGs沉積減少糖胺聚糖（GAGs）是軟骨組織特異性基質(zhì)蛋白，在OA進(jìn)展過程中，糖胺聚糖沉積減少會引起膠原蛋白丟失過多。為了評估DA對GAGs沉積變化的影響，使用IL-1β與軟骨細(xì)胞共同孵育模擬OA體外微環(huán)境。結(jié)果顯示，不論是在C28/I2軟骨細(xì)胞（圖3A）還是人軟骨細(xì)胞（圖3B），IL-1β處理組GAGs沉積量較對照組明顯降低，加入DA后GAGs沉積量增加。

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文30圖3OA體外軟骨細(xì)胞模型中加入DA能夠遏制IL-1β引起的GAGs沉積減少。（A）C28/I2軟骨細(xì)胞；（B）人軟骨細(xì)胞。原始放大倍數(shù)200倍，比例尺=50μm。3.4DA對OA體外模型中軟骨細(xì)胞合成代謝與分解代謝的影響軟骨細(xì)胞負(fù)責(zé)細(xì)胞外基質(zhì)的合成與代謝，合成與分解代謝失衡是導(dǎo)致軟骨退變的重要因素�；|(zhì)金屬蛋白能降解細(xì)胞外基質(zhì)中多種蛋白成分，在OA發(fā)病過程中扮演重要角色。其中MMP-1和MMP-13是導(dǎo)致膠原框架降解的主要因素，MMP-3負(fù)責(zé)降解蛋白聚糖。II型膠原蛋白是軟骨組織主要結(jié)構(gòu)蛋白，能夠排列成三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)容納其他膠原蛋白與非膠原蛋白，從而使軟骨組織具備一定的機械可變性。采用qRT-PCR和Westernblot兩種實驗方法檢測DA在OA體外微環(huán)境中對合成代謝指標(biāo)蛋白（CollagenII），分解代謝指標(biāo)蛋白（MMP-1、MMP-3、MMP-13）表達(dá)的調(diào)控。結(jié)果顯示，IL-1β能夠明顯引起C28/I2軟骨細(xì)胞（圖4A、B、C、D、I）和人軟骨細(xì)胞（圖4E、F、G、H、J）中MMP-1、MMP-3、MMP-13表達(dá)增加以


本文編號：3371462