目的:分析比較miRNA-1271-5p在乳腺癌組織樣本和細(xì)胞系中的表達(dá)水平,進(jìn)而探討miRNA-1271-5p在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的生物學(xué)功能和相關(guān)分子機制。材料和方法:為了篩選正常組織和乳腺癌組織中具有差異表達(dá)的miRNA,首先在癌癥基因組圖譜（TCGA）組織樣本數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行分析篩選,而后對54對腺癌組織及鄰近的正常組織樣本采用實時定量聚合酶鏈反應(yīng)（RT-qPCR）檢測驗證。在得出的miRNA-1271-5p相對表達(dá)量結(jié)果中,miRNA-1271-5p在乳腺癌樣本中較正常組織樣本表達(dá)降低近50%。使用EdU細(xì)胞增殖檢測、單克隆形成實驗評價miRNA-1271-5p對增殖能力的影響,使用流式細(xì)胞術(shù)（FCM）評價對凋亡進(jìn)程的影響。通過裸鼠異種移植模型皮下成瘤實驗,觀察體內(nèi)miRNA-1271-5p對于腫瘤形成的影響。使用生物信息分析篩選乳腺癌中miRNA-1271-5p的潛在靶標(biāo),并通過熒光素酶報告基因?qū)嶒�、RT-qPCR和免疫印跡（Western Blot）實驗進(jìn)行驗證。通過WB實驗研究下游Calpain 1和Caspase 12信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路參與介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的相關(guān)進(jìn)程。結(jié)果:1.miR... 

【文章來源】：南京醫(yī)科大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

miR-1271-5p抑制腫瘤在體內(nèi)的生長a裸鼠脅肋下注射28天后形成的腫瘤大小比較；b單個腫瘤質(zhì)量均值的

p<0.05）；而 ZR-75-1-inhibitor 的凋亡率則顯著低于 ZR-75-1-N.C.（圖4b，p<0.05）。圖 4：miR-1271-5p 對細(xì)胞凋亡的影響a 穩(wěn)定過表達(dá) miR-1271-5p 的 SUM1315 細(xì)胞凋亡率顯著增高；b 穩(wěn)定抑制 miR-1271-5p 的 ZR-75-1 細(xì)胞凋亡率顯著降低。5 TMBIM6是miR-1271-5p的直接下游為了探究 miR-1271-5p 在乳腺癌中的作用機制，我們對 TCGA 數(shù)據(jù)庫中1086 對乳腺癌組織進(jìn)行相關(guān)分析，發(fā)現(xiàn) miR-1271-5p 和 TMBIM6mRNA 的表達(dá)水平之間存在負(fù)相關(guān)（Pearson's 相關(guān)，r=-0.189，p<0.01）。由此我們采用雙熒光素酶報告基因?qū)嶒�，以確定 TMBIM6 是否在乳腺癌中是 miR-1271-5p 的直接靶點。我們將具有結(jié)合位點的野生

6-mut）克隆到單獨的 GV272 螢光素酶報道基因載體中（圖5c）。將 miR-1271-5p 過表達(dá)(mimics)或陰性對照質(zhì)粒分別與 TMBIM6-wt 或 TMBIM6-mut 序列載體共轉(zhuǎn)染。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，相比于對照組，在miR-1271-5p 過表達(dá)質(zhì)粒和兩種野生型 TMBIM6 3'UTR 序列載體（TMBIM6- wt1）共同轉(zhuǎn)染 SUM1315 細(xì)胞時，熒光信號發(fā)生減弱；將野生型 TMBIM6 3'UTR 序列載體改為突變型序列載體時，熒光信號減弱程度降低。上述結(jié)果表明 TMBIM6 基因可能是 miR-1271-5p 的直接靶基因，并且其表達(dá)受 miR-1271-5p 的負(fù)性調(diào)控。圖 5：miR-1271-5p 直接作用于 TMBIM6 的證據(jù)a 通過對 TCGA 數(shù)據(jù)庫的分析發(fā)現(xiàn)，miR-1271-5p 與 TMBIM6 存在線性相關(guān)關(guān)系（Pearson 相關(guān)，負(fù)相關(guān)）；b miR-1271-5p 與 TMBIM-6 3’非翻譯區(qū)存在互補配對的序?

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]Low levels of Bax inhibitor-1 gene expression increase tunicamycin-induced apoptosis in human neuroblastoma SY5Y cells[J]. Dan Wu1,Peirong Wang1,2,Shiyao Wang1 1Department of Medical Genetics,School of Basic Medical Sciences,Peking University,Beijing 100191,China 2Institute of Biophysics,Chinese Academy of Sciences,Beijing 100190,China.  Neural Regeneration Research. 2012(17)



本文編號：3367271