目的:（1）在軟骨細(xì)胞體外培養(yǎng)過(guò)程中,分析mi R-1抑制或過(guò)表達(dá)后對(duì)小鼠肋軟骨細(xì)胞分化增殖與基質(zhì)代謝的影響,檢測(cè)相關(guān)指標(biāo)。（2）在軟骨細(xì)胞體外培養(yǎng)過(guò)程中,過(guò)表達(dá)mi R-1后及抑制后對(duì)Ihh基因及蛋白水平的影響,并檢測(cè)Ihh通路相關(guān)蛋白的變化,探究mi R-1是否通過(guò)直接作用于Ihh對(duì)下游產(chǎn)生作用。方法:（1）mi R-1對(duì)小鼠肋軟骨細(xì)胞增殖,基質(zhì)代謝和分化影響分析:（1）取出生5天小鼠胸廓軟骨組織,用兩步酶消法進(jìn)行分離軟骨細(xì)胞,行原代及傳代培養(yǎng),并按100n M濃度轉(zhuǎn)染mi R-1模擬物/mi R-1抑制劑及其對(duì)照組進(jìn)入細(xì)胞。應(yīng)用RT-PCR分析mi R-1轉(zhuǎn)染24h后的轉(zhuǎn)染效率。（2）利用EDU實(shí)驗(yàn),CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)錄后細(xì)胞增殖情況（3）mi R-1對(duì)軟骨細(xì)胞增殖及分化的影響:以100n M進(jìn)行mi R-1模擬物/mi R-1抑制劑及對(duì)照的細(xì)胞轉(zhuǎn)染。培養(yǎng)24h后,RT-PCR技術(shù)分析Ⅱ型膠原、Ⅹ型膠原、MMP-13等指標(biāo)m RNA的變化情況。（4）對(duì)轉(zhuǎn)染細(xì)胞培養(yǎng)48h后上清液Ⅹ型膠原、MMP-13等指標(biāo)的含量進(jìn)行ELISA檢測(cè)。（5）免疫熒光用于檢測(cè)各組Ⅱ型膠原、Ihh含量。... 

【文章來(lái)源】：山西醫(yī)科大學(xué)山西省

【文章頁(yè)數(shù)】：61 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

小鼠肋軟骨細(xì)胞免疫熒光染色

miR-1轉(zhuǎn)染效率檢測(cè)，轉(zhuǎn)染后miR-1表達(dá)情況，U6為內(nèi)參，miR-1組與ConmiR組相比，miR-1水平明顯增高，*P＜0.05

Anti-miR-1轉(zhuǎn)染效率，轉(zhuǎn)染后miR-1表達(dá)情況，U6為內(nèi)參，Anti-miR-1組與Control組相比，miR-1水平明顯降低，*P＜0.05


本文編號(hào)：3363566