目的:分析OVOL2在乳腺癌細(xì)胞系中的表達(dá)特征,研究OVOL2對乳腺癌細(xì)胞表面標(biāo)志CD44的影響,探討OVOL2對乳腺癌細(xì)胞干性的調(diào)控機(jī)制;檢測過表達(dá)OVOL2對乳腺癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力的影響;通過研究乳腺癌患者無復(fù)發(fā)生存時(shí)間,分析OVOL2與乳腺癌臨床預(yù)后的相關(guān)性。方法:1.采用Western blotting方法檢測不同乳腺癌細(xì)胞中OVOL2蛋白的表達(dá)水平;在不同乳腺癌細(xì)胞中過表達(dá)和敲減OVOL2,檢測CD44蛋白表達(dá)水平變化;2.利用流式細(xì)胞檢測方法檢測過表達(dá)OVOL2對具有CD44⁺/CD24^-/low標(biāo)記的乳腺癌細(xì)胞比例的影響;3.采用細(xì)胞培養(yǎng),進(jìn)行劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell實(shí)驗(yàn)和乳腺微球體培養(yǎng)的方法,過表達(dá)OVOL2,研究OVOL2對乳腺癌細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移能力的影響;4.采用染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)檢測OVOL2在CD44啟動子上的結(jié)合位點(diǎn),研究OVOL2調(diào)節(jié)干性作用的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ);5.分析Kaplan-Meier Plotter數(shù)據(jù)庫數(shù)據(jù)進(jìn)行生存分析,研究OVOL2的表達(dá)水平與乳腺癌臨床預(yù)后的相關(guān)性。6.采用SPSS19.... 

【文章來源】：河南科技大學(xué)河南省

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 緒論
    1.1 研究背景
        1.1.1 乳腺癌概述
        1.1.2 腫瘤干細(xì)胞
        1.1.3 乳腺癌干細(xì)胞鑒定分選
        1.1.4 乳腺癌分型
        1.1.5 乳腺癌干性相關(guān)信號通路
        1.1.6 CD44 和腫瘤干細(xì)胞
        1.1.7 OVOL2 與乳腺癌干細(xì)胞
    1.2 研究目的
    1.3 研究意義
第2章 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 主要實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.2 細(xì)胞株
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)胞凍存
        2.2.2 細(xì)胞復(fù)蘇
        2.2.3 細(xì)胞傳代
        2.2.4 PEI(聚乙烯亞胺)轉(zhuǎn)染
        2.2.5 慢病毒包裝及感染細(xì)胞
        2.2.6 細(xì)胞計(jì)數(shù)方法
        2.2.7 siRNA轉(zhuǎn)染
        2.2.8 Transwell實(shí)驗(yàn)
        2.2.9 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)
        2.2.10 乳腺微球體培養(yǎng)
        2.2.11 流式細(xì)胞檢測
        2.2.12 提取細(xì)胞RNA
        2.2.13 RNA反轉(zhuǎn)錄
        2.2.14 RT-PCR
        2.2.15 蛋白質(zhì)提取實(shí)驗(yàn)
        2.2.16 BCA法測定蛋白質(zhì)濃度
        2.2.17 蛋白質(zhì)免疫印跡
        2.2.18 染色質(zhì)免疫沉淀(CHIP)
        2.2.19 感受態(tài)細(xì)胞制備
        2.2.20 轉(zhuǎn)化
        2.2.21 質(zhì)粒提取
第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 OVOL2 與乳腺癌復(fù)發(fā)的關(guān)系
    3.2 OVOL2抑制乳腺癌干細(xì)胞相關(guān)表型
        3.2.1 OVOL2 抑制乳腺球形成
        3.2.2 OVOL2 抑制CD44~+/CD24~(?/low)細(xì)胞比例(MDA-MB-231 細(xì)胞)
        3.2.3 OVOL2 抑制侵襲能力
        3.2.4 OVOL2 抑制遷移能力
    3.3 OVOL2 下調(diào)CD44 的表達(dá)
        3.3.1 OVOL2在不同乳腺癌細(xì)胞株中表達(dá)
        3.3.2 OVOL2在MDA-MB-231 細(xì)胞中過表達(dá)下調(diào)CD
        3.3.3 MCF-7 細(xì)胞敲減OVOL2后CD44 表達(dá)上調(diào)
    3.4 CHIP
第4章 討論
第5章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間的研究成果



本文編號：3356144