軟骨細胞的主要功能是維持軟骨組織中基質代謝的平衡,而基質代謝平衡長期被破壞會造成軟骨組織的損傷,進而引發(fā)骨關節(jié)炎等一系列關節(jié)疾病。影響軟骨細胞基質代謝的因素有很多,如尼古丁、雌激素等,這些因素對細胞代謝的影響目前尚有爭議,并鮮有報道關注多因素間的交叉作用。因此,本研究主旨探討尼古丁和雌激素單獨或聯合作用對軟骨細胞的胞外基質代謝的影響及其分子機制。研究中以鐵硒傳遞蛋白（ITS）誘導成熟之后的軟骨前體ATDC5細胞作為研究對象,采用細胞染色、免疫組化、Western blot和Real-time PCR等分子生物學的方法對處理后的軟骨細胞基質及代謝過程中重要因子進行了檢驗。結果發(fā)現0.06mM尼古丁的直接處理會對軟骨細胞胞外基質的分泌有抑制作用,并且會促進基質降解酶MMP13表達,從而抑制基質合成相關蛋白BMP-7合成。而生理濃度的1nM雌激素對細胞的影響與之相反。并且在兩種處理因素同時存在的情況下,雌激素還能夠減輕尼古丁對細胞的損傷。另外,為了更好地模擬骨關節(jié)炎早期軟骨細胞的炎癥狀態(tài),我們使用尼古丁誘導巨噬細胞產生的炎性上清來誘發(fā)軟骨細胞的炎癥反應,并且進一步研究了雌激素和TNF-α,I... 

【文章來源】：上海交通大學上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數】：65 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

鐵硒傳遞蛋白誘導前后ATDC5細胞胞外基質及相關蛋白檢測結果圖

上海交通大學碩士學位論文-21-結果在圖2-2中展示，從結果中能夠看出，從均值來看，僅僅加入雌激素或者僅僅加入尼古丁細胞的活性會有一定的升高，而在兩種藥物都存在的情況下，乳酸脫氫酶均值會有所降低，這說明藥物處理對活性有一定影響。但是，由于重復的組別數據有所差異，進行統(tǒng)計學分析之后，發(fā)現四組的吸光度在統(tǒng)計學上沒有顯著差異。所以，我們不能夠下結論說細胞的活性會受到藥物處理的影響。綜合結果來看，藥物處理對細胞活性有一定影響但是對其影響不具備顯著性。圖2-2.乳酸脫氫酶對四組藥物處理細胞活性檢驗結果結果為使用乳酸脫氫酶標準試劑盒得到，使用分光光度法測量四組細胞的乳酸脫氫酶含量統(tǒng)計學上沒有顯著性的差異。（*:P<0.05,n=3）Figure2-2.ResultsofLDHassaysoffourgroupsofdrugstreatedchondrocytes.TheresultswereobtainedusingaLDHAssaystandardkit,andtherewasnostatisticallysignificantdifferenceofthefourgroupsofcellsmeasuredbyspectrophotometrymethod.(*:P<0.05,,n=3)2.3.3蛋白聚糖水平在藥物處理影響下的變化雌激素及尼古丁的處理能夠影響細胞胞外蛋白聚糖表達的變化，在圖2-3的甲苯胺藍染色結果中，我們可以看出，與空白對照組相比，雌激素處理組，細胞胞外的藍紫色程度更深，而尼古丁處理組藍紫色程度要淺一些。而在雌激素存在的情況下，依然加入尼古丁的組，細胞的藍紫色程度與空白對照組接近。研究中還使用了ImageProPlus的軟件對染色的平均光密度進行了檢測。從檢測得到的平均光密度值可以看出，雌激素處理組的值比對照組有顯著升高，而尼古丁處理組的值比對照組有顯著降低，而在雌激素和尼古丁同時存在的組別，光密度的值比僅僅使用尼古丁處理有顯著的上升，和空白對照組的光密度值接近。綜合上述

上海交通大學碩士學位論文-22-結果能夠看出，雌激素本身對細胞蛋白聚糖的分泌有促進的作用，而尼古丁會降低蛋白聚糖的表達，對基質分泌有一定破壞作用。另外，雌激素能夠減少尼古丁對蛋白聚糖分泌的影響，使得細胞蛋白聚糖依然能夠維持在正常水平。圖2-3.四組藥物處理細胞胞外蛋白聚糖甲苯胺藍染色結果實驗對甲苯胺藍染色結束之后的細胞進行了倒置顯微鏡觀察并且拍攝了顯微照片。顯微照片中甲苯胺藍染色程度使用軟件ImageProPlus6.0對整張圖片部分進行了光密度分析。（*：P<0.05，n=3）Figure2-3.Resultsofextracellularaggrecantoluidinebluestaininginfourgroupsofdrug-treatedcells.Thecellsaftertoluidinebluestainingwereobservedusinganinvertedmicroscopeandmicrographsweretaken.ThedegreeoftoluidinebluestaininginthephotographswasdetectedusingthesoftwareImageProPlus6.0amongtheentireimageportion.(*:P<0.05,n=3)2.3.4二型膠原水平在藥物處理下的變化雌激素及尼古丁的處理還能夠影響細胞基質二型膠原表達的變化，在圖2-4

【參考文獻】：
期刊論文
[1]雌激素及相關化合物干預骨關節(jié)炎作用機制:關節(jié)保護與骨軟骨細胞的修復[J]. 王健,陶海榮.  中國組織工程研究. 2014(33)
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[3]雌激素與女性骨關節(jié)炎[J]. 宋亦軍,林守清.  國外醫(yī)學.婦產科學分冊. 2005(05)

碩士論文
[1]尼古丁在巨噬細胞介導下對血管內皮細胞粘附分子表達的作用[D]. 王亞靜.山西醫(yī)科大學 2003



本文編號：3325520