研究背景骨肉瘤（Osteosarcoma,OSA）是一種由骨間質(zhì)細(xì)胞發(fā)展而來,常發(fā)病于青少年的惡性腫瘤。其惡性程度高,易轉(zhuǎn)移且預(yù)后差。長(zhǎng)鏈非編碼RNA（Long non-coding RNAs,lncRNAs）是一類長(zhǎng)度大于200個(gè)核苷酸的RNA轉(zhuǎn)錄物。由于其缺少開放閱讀編碼框（Opening reading frame,OFR）,故不能編碼蛋白。近年來,許多文獻(xiàn)報(bào)道lncRNAs能夠在多種人類腫瘤中發(fā)揮調(diào)控作用。結(jié)腸癌相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子2（Colon cancer-associated transcript 2,CCAT2）是一種新近發(fā)現(xiàn)的lncRNA,在多種腫瘤中表現(xiàn)促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)的作用。研究目的本研究旨在探究CCAT2是否參與骨肉瘤發(fā)生發(fā)展,以及可能涉及miR-200b的內(nèi)在調(diào)控機(jī)制。實(shí)驗(yàn)首先檢測(cè)CCAT2和miR-200b在骨肉瘤組織及相應(yīng)的癌旁組織樣本,以及骨肉瘤細(xì)胞及人正常成骨細(xì)胞中的表達(dá)。隨后分析沉默CCAT2后,骨肉瘤細(xì)胞增殖、凋亡、遷移和侵襲能力的改變。研究方法首先收集骨肉瘤組織樣本及相應(yīng)的癌旁組織樣本,并培養(yǎng)人骨肉瘤MG63,U20S,US732,Saos-2細(xì)胞及人正常成... 

【文章來源】：山東大學(xué)山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：119 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖２－１?ＣＣＡＴ２在骨肉瘤（Ｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａ，?ＯＳＡ）組織及其細(xì)胞系發(fā)生高表達(dá)

２．３．３?ＣＣＡＴ２沉畎抑制細(xì)胞活力??將ｓｉ－ＣＣＡＴ２轉(zhuǎn)染至骨肉瘤細(xì)胞系ＭＧ６３和Ｕ２０Ｓ中后，我們采用ｑＲＴ－ＰＣＲ的方法??驗(yàn)證轉(zhuǎn)染效率，結(jié)果如圖２－３所示，ＭＧ６３?（尸＜?０．０１）和Ｕ２０Ｓ?（尸＜?０．０１）細(xì)胞系轉(zhuǎn)染??ｓｉ－ＣＣＡＴ２后，細(xì)胞中的ＣＣＡＴ２的表達(dá)量顯著降低，由此可證明，我們有效地構(gòu)建了??ＣＣＡＴ２低表達(dá)的骨肉瘤細(xì)胞系ＭＧ６３和Ｕ２〇Ｓ。相應(yīng)地，為探宄ＣＣＡＴ２沉默對(duì)骨肉瘤細(xì)??胞生命活動(dòng)的影響，我們進(jìn)一步檢測(cè)并分析了細(xì)胞活力、凋亡、增殖、遷移和侵襲以及相??關(guān)蛋白表達(dá)量的變化。??■Ｂ?Ｃｏｎｔｎｉ?ｍ?Ｓｔ＜ＮＣ?ａｍ?？ｉ－ＣＣＡＴ２??Ｈｉｆ?ｉｆ??ｉｉｌｌｉｉＬ??ＭＯＭ?ＣＣＡＴ２?Ｕ２０Ｓ??圖２－３?ＭＧ６３和Ｕ２０Ｓ細(xì)胞轉(zhuǎn)染ｓｉ－ＣＣＡＴ２后，ＣＣＡＴ２表達(dá)受到抑制。采用ｑＲＴ－ＰＣＲ方法測(cè)定??ＭＧ６３和Ｕ２０Ｓ細(xì)胞中ＣＣＡＴ２的表量。數(shù)據(jù)均表示為平均數(shù)＋標(biāo)準(zhǔn)偏差（Ｓｔａｎｄａｒｄ?ｄｅｖｉａｔｉｏｎ，?ＳＤ）?（Ｎ??＝３，＊＊／＞＜?０．０１同對(duì)照組相比具有顯著性差異）。??Ｆｉｇ．?２－３?ＣＣＡＴ２?ｗａｓ?ｋｎｏｃｋｅｄ?ｄｏｗｎ?ｉｎ?ＭＧ６３?ａｎｄ?Ｕ２０Ｓ?ｃｅｌｌｓ?ｂｙ?ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｎｇ?ｗｉｔｈ?ｓｉ－ＣＣＡＴ２．?ｑＲＴ－ＰＣＲ??ａｎａｌｙｓｉｓ?ｗａｓ?ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ?ｔｏ?ｄｅｔｅｃｔ?ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ＣＣＡＴ２?ｉｎ?ｔｈｅ?ＭＧ６３?ａｎｄ?Ｕ２０Ｓ?ｃｅｌｌｓ．?Ａｌｌ?ｄａｔａ?ｗｅｒｅ??ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ?ａｓ?ｍｅａｎ?＋?ＳＤ?（Ｎ?＝?３

?＾?＾?＾??圖２－２?ｍｉＲ－２００ｂ在骨肉瘤（Ｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａ，?ＯＳＡ）組織及其細(xì)胞系中發(fā)生低表達(dá)。（Ａ）采用ｑＲＴ－??ＰＣＲ方法測(cè)定ＯＳＡ組織及對(duì)照組非腫瘤組織中ｍｉＲ－２００ｂ的表達(dá)水平。（Ｂ）采用ｑＲＴ－ＰＣＲ方法測(cè)定??ｍｉＲ－２００ｂ在人ＯＳＡ細(xì)胞系ＭＧ６３、Ｕ２０Ｓ、ＯＳ７３２和Ｓａｏｓ－２以及人成骨細(xì)胞Ｈｆｏｂｌ．１９中的表達(dá)量。數(shù)??據(jù)均表示為平均數(shù)＋標(biāo)準(zhǔn)偏差（Ｓｔａｎｄａｒｄｄｅｖｉａｔｉｏｎ，ＳＤ）?（Ｎ?＝?３，或＊＊Ｐ＜０．０１同非腫瘤組織??或細(xì)胞相比具有顯著性差異）。??Ｆｉｇ．?２－２?ｍｉＲ－２００ｂ?ｗａｓ?ｌｏｗ?ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ?ｉｎ?ｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａ?（ＯＳＡ）?ｔｉｓｓｕｅｓ?ａｎｄ?ｃｅｌｌ?ｌｉｎｅｓ．?（Ａ）?ｑＲＴ－ＰＣＲ??ａｎａｌｙｓｉｓ?ｗａｓ?ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ?ｔｏ?ｄｅｔｅｃｔ?ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ｍｉＲ－２００ｂ?ｉｎ?ＯＳＡ?ｔｉｓｓｕｅｓ?ａｎｄ?ｔｈｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｎｏｎ－ｔｕｍｏｕｒ??ｔｉｓｓｕｅｓ．?（Ｂ）?ｑＲＴ－ＰＣＲ?ｗａｓ?ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ?ｔｏ?ｄｅｔｅｃｔ?ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ｍｉＲ－２００ｂ?ｉｎ?ｈｕｍａｎ?ＯＳＡ?ｃｅｌｌ?ｌｉｎｅｓ?ＭＧ６３，??Ｕ２０Ｓ，?ＯＳ７３２?ａｎｄ?Ｓａｏｓ－２?ａｓ?ｗｅｌｌ?ａｓ?ｈｕｍａｎ?ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔ?ｃｅｌｌ?ｌｉｎｅｓ?Ｈｆｏｂｌ．１９．?Ａｌｌ?ｄａｔａ?ｗｅｒｅ?ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ?ａｓ?ｍｅａｎ?＋??ＳＤ?（Ｎ?＝?３

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]腫瘤miRNAs調(diào)控機(jī)制的研究進(jìn)展與展望[J]. 黃辰,劉利英,倪磊,宋土生.  西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2015(04)
[2]三氧化二砷下調(diào)MG-63骨肉瘤細(xì)胞IEX-1基因表達(dá)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制研究[J]. 肖濤,朱武,姚茂金,方建珍,羅遠(yuǎn)明,曾偉,胡金璽.  生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展. 2008(07)



本文編號(hào)：3325338