發(fā)布時(shí)間：2021-08-05 04:51

　　背景黃韌帶肥厚是腰椎椎管狹窄的一個(gè)重要因素,嚴(yán)重時(shí)會(huì)壓迫神經(jīng)根和馬尾,導(dǎo)致腰部疼痛及間歇性跛行。盡管有研究認(rèn)為黃韌帶肥厚可能和各種炎癥因子、生長(zhǎng)因子、老齡及機(jī)械應(yīng)力有關(guān),但是導(dǎo)致黃韌帶肥厚的關(guān)鍵分子及其調(diào)控機(jī)制仍然未知。另外,由于缺乏有效的黃韌帶肥厚動(dòng)物模型,尚未發(fā)現(xiàn)關(guān)于黃韌帶肥厚分子機(jī)制的體內(nèi)研究。目的本研究旨在:1.發(fā)現(xiàn)黃韌帶肥厚的關(guān)鍵調(diào)控蛋白,探索其調(diào)控細(xì)胞外基質(zhì)形成的機(jī)制。2.建立小鼠黃韌帶肥厚模型,對(duì)黃韌帶肥厚的分子機(jī)制進(jìn)行體內(nèi)驗(yàn)證。方法1.收集正常和肥厚的人黃韌帶組織,組織學(xué)染色檢測(cè)兩組纖維化情況。用同位素相對(duì)標(biāo)記與絕對(duì)定量（isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ）技術(shù)對(duì)兩組樣本進(jìn)行分析,整合轉(zhuǎn)錄組與蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù),發(fā)現(xiàn)關(guān)鍵蛋白:細(xì)胞因子受體樣因子1（Cytokine Receptor Like Factor 1,CRLF1）。使用免疫組化和qPCR技術(shù)對(duì)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。2.分離并體外培養(yǎng)人正常黃韌帶細(xì)胞,使用TGF-β1和成熟的重組人CRLF1刺激黃韌帶細(xì)胞,通過(guò)免疫熒光、Westen Blot及q... 

【文章來(lái)源】：南方醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁(yè)數(shù)】：118 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１－１．黃初帶組織標(biāo)本Ｈ＆Ｅ和馬松染色：Ａ．正常黃軔帶中纖維排列規(guī)則；Ｂ．增生黃鈿帶??中纖維排列不規(guī)則，發(fā)生斷裂

ａｇｅｎ?ｆｉｂｅｒｓ；?Ｄ．?Ｔｈｅ?ｒｅｄ?ｅｌａｓｔｉｃ?ｆｉｂｅｒｓ?ｉｎ?ｔｈｅ??ｔｈｉｃｋ?ｌｉｇａｍｅｎｔｕｍ?ｆｌａｖｕｍ?ａｒｅ?ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ?ｒｅｄｕｃｅｄ．?（ｎ＝２０），?Ｓｃａｌｅ?ｂａｒｓ?＝?１００?（ｉｍ．??３．２肥厚組黃韌帶中Ｉ、Ｉ丨丨型膠原纖維增多，肌成纖維細(xì)胞增多，ｐ－ＥＲＫｌ／２表??達(dá)升髙。??免疫組化染色結(jié)果：對(duì)照組黃韌帶組織中；Ｉ型膠原纖維、ＩＩＩ型膠原纖維??較少，肥厚黃軔帶標(biāo)本中Ｉ型膠原纖維、ＩＩＩ型膠原纖維明顯增多（圖１－２）。肌??成纖維細(xì)胞標(biāo)志物ａ－ＳＭＡ在肥厚黃軔帶中表達(dá)升高，ｐ－ＥＲＫｌ／２在肥厚的黃初帶??中表達(dá)增高（圖１－３）。差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖１－４）。??Ａ?Ｂ??Ｃ?Ｄ??ｖ?＊Ｊ?ｖ??？?？?＊?ｖ?Ｖ＊?＊?、?■?ｔ??對(duì)照組?肥厚組??圖１－２．黃韌帶組織標(biāo)本Ｉ型和ＩＩ丨型膠原纖維免疫組化染色，棕色為陽(yáng)性。Ａ．對(duì)照組黃初??帶中Ｉ型膠原纖維很少；Ｂ．肥厚組黃初帶中Ｉ型膠原纖維明顯增多。Ｃ．正常黃籾帶中丨丨Ｉ??型膠原纖維很少；Ｄ．肥厚的黃韌帶中丨丨１型膠原纖維明顯增多。（ｎ?＝?２０），比例尺＝１００?ｐｍ。??Ｆｉｇｕｒｅ?１－２．?Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ?ｓｔａｉｎｉｎｇ?ｏｆ?ｃｏｌｌａｇｅｎ?ｆｉｂｅｒｓ?ｏｆ?ｔｙｐｅ?Ｉ?ａｎｄ?ｔｙｐｅ?ＩＩＩ?ｏｆ?ｌｉｇａｍｅｎｔｕｍ??ｆｌａｖｕｍ，?（ｂｒｏｗｎ?ｉｓ?ｐｏｓｉｔｉｖｅ?ａｒｅａ）．?Ａ．?Ｔｈｅｒｅ?ｗｅｒｅ?ｆｅｗ?ＣＯＬ１?ｆｉｂｅｒｓ?ｉｎ?ｔｈｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｇｒｏｕｐ?ｌｉｇａｍｅｎｔｕｍ??ｆｌａｖｕｍ：?Ｂ

ｔｒｏｐｈｉｃ?ｇｒｏｕｐ?ｌｉｇａｍｅｎｔｕｍ?ｆｌａｖｕｍ．?（ｎ?＝?２０），?Ｓｃａｌｅ??ｂａｒｓ?＝?１００?ｊｉｍ．??Ａ／?Ｂ?？、？?？??＾?％?％?＃??５］?＇?，??，?？??ｙｉ??士?．?，?？．??ｋ?ｆ?９??ｎ?Ｃ?Ｄ?＿?－??－ａｙ??ｒｉ?＇?？？??ｙ：?．??ａ?．?，?、??ｒ＊ｏ?／?—?＊?，??１?？?螓??？??ｔ??／?？?￥??對(duì)照組?肥厚組??圖１－３．黃韌帶組織標(biāo)本ａ－ＳＭＡ和ｐ－ＥＲＫｌ／２免疫組化染色，棕色為陽(yáng)性。Ａ．對(duì)照組黃韌??帶組織中很少會(huì)發(fā)現(xiàn)ａ－ＳＭＡ陽(yáng)性細(xì)胞；Ｂ．增生組黃初帶中組織中可見大量ａ－ＳＭＡ陽(yáng)性細(xì)??胞。Ｃ．對(duì)照組黃軔帶中ｐ－ＥＲＫｌ／２陽(yáng)性細(xì)胞很少；Ｄ．肥厚組黃軔帶組織中可見較多的??ｐ－ＥＲＫｌ／２?陽(yáng)性細(xì)胞。（ｎ＝２０），比例尺＝５０ｐｍ。??Ｆｉｇｕｒｅ?１－３．?ａ－ＳＭＡ?ａｎｄ?ｐ－ＥＲＫ?１／２?ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ?ｓｔａｉｎｉｎｇ?ｉｎ?ｌｉｇａｍｅｎｔｕｍ?ｆｌａｖｕｍ?ｓａｍｐｌｅｓ，??ｂｒｏｗｎ?ｉｓ?ｐｏｓｉｔｉｖｅ?ａｒｅａ．?（Ａ）?ａ－ＳＭＡ－ｐｏｓｉｔｉｖｅ?ｃｅｌｌｓ?ａｒｅ?ｒａｒｅｌｙ?ｆｏｕｎｄ?ｉｎ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｇｒｏｕｐ；?（Ｂ）?Ａ?ｌａｒｇｅ??ｎｕｍｂｅｒ?ｏｆ?ａ－ＳＭＡ－ｐｏｓｉｔｉｖｅ?ｃｅｌｌｓ?ｃａｎ?ｂｅ?ｓｅｅｎ?ｉｎ?ｔｈｅ?ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｉｃ?ｇｒｏｕｐ；?（Ｃ）?Ｆｅｗ?ｐ－ＥＲＫ?１／２??ｐｏｓｉｔｉｖｅ?ｃｅｌｌｓ?ｉｎ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｇｒｏｕｐ?ｗｅｒｅ

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Role of cytokine receptor-like factor 1 in hepatic stellate cells and fibrosis[J]. Lela Stefanovic,Branko Stefanovic.  World Journal of Hepatology. 2012(12)



本文編號(hào)：3323104