類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎是一種以關(guān)節(jié)滑膜為主要靶組織的慢性、系統(tǒng)性、炎癥性及自身免疫功能障礙性疾病。其典型的病理變化是滑膜異常增生以及關(guān)節(jié)軟骨和骨質(zhì)的破壞,后期可以導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸形,對病人的身體和心理造成嚴(yán)重?fù)p害。其病因尚不明確。國內(nèi)成年人發(fā)病率約為0.34%,其中女性患者數(shù)量高于男性。目前研究認(rèn)為成纖維樣滑膜細(xì)胞在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的炎性反應(yīng)和關(guān)節(jié)損傷方面起著非常重要的作用。右美托咪定是臨床常用的靜脈輔助鎮(zhèn)靜藥,其不僅具有鎮(zhèn)靜作用,研究表明其還具有抗炎和抗癌細(xì)胞侵襲、遷移的作用。本實(shí)驗(yàn)中在動物模型中使用完全弗氏佐劑模擬類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎模型;提取類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎病人膝關(guān)節(jié)成纖維樣滑膜細(xì)胞,使用TNF-α刺激細(xì)胞。探索右美托咪定對佐劑誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎大鼠的作用,以及對TNF-α刺激的成纖維樣滑膜細(xì)胞的作用。實(shí)驗(yàn)方法:在動物實(shí)驗(yàn)中,把56只SD雌性大鼠隨機(jī)分為8組,每組7只,分別為正常組、完全弗式佐劑組、右美托咪定+完全弗式佐劑治療組（5μg/Kg、10μg/Kg、20μg/Kg）、單獨(dú)右美托咪定處理組（5μg/Kg、10μg/Kg、20μg/Kg）。對大鼠足趾體積、血清中炎癥因子（IL-6、TNF-α、IL-1β、IL-1... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

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【學(xué)位級別】：碩士

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右美托咪定對佐劑誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎大鼠模型具有保護(hù)作用

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文20圖2.右美托咪定抑制佐劑誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎大鼠滑膜組織中IL-6、IL-1β、MMP-3、MMP-9蛋白和基因的表達(dá)。（A）使用蛋白免疫印跡法分析大鼠滑膜組織中IL-6，IL-1β，MMP-3和MMP-9的水平。（B）通過RT-qPCR檢測大鼠滑膜組織中IL-6，IL-1β，MMP-3和MMP-9的水平。所有值均表示為平均值±S.D。CFA，完全弗氏佐劑；DEX，右美托咪定；AA，佐劑性關(guān)節(jié)炎；Con，對照組；*對照組VS模型組；＃模型組VSDEX治療組；**P<0.01，＃P<0.05和##P<0.01。Fig.2.DEXinhibitstheexpressionofIL-1β,IL-6,MMP-3,andMMP-9inthesynovialtissueofAArats.(A)ThelevelsofIL-6,IL-1β,MMP-3andMMP-9inratsynovialtissueswereanalyzedusingWesternblots.(B)ThelevelsofIL-6,IL-1β,MMP-3andMMP-9inratsynovialtissuesweredetectedbyRT-qPCR.Allvaluesareexpressedasthemean±S.D.CFA,completeFreund’sadjuvant;DEX,dexmedetomidine;AA,adjuvant-inducedarthritis;Con,controlgroup;*controlgroupVSmodelgroup;#modelgroupVSDEXtreatmentgroup;**P<0.01,#P<0.05,and##P<0.01.3.3右美托咪定抑制了TNF-α刺激的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎成纖維樣滑膜細(xì)胞（RA-FLSs）的侵襲、遷移和炎癥反應(yīng)為了檢測右美托咪定是否可以抑制類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎成纖維樣滑膜細(xì)胞的炎癥反應(yīng)、侵襲和遷移，我們首先用右美托咪定預(yù)處理細(xì)胞1小時，然后加入TNF-α（10ng/ml）刺激24小時，收集細(xì)胞并提取細(xì)胞中的蛋白和RNA。在transwell實(shí)驗(yàn)中，我們先使用右美托咪定預(yù)處理細(xì)胞1小時，然后再加入TNF-α刺激48小時后對細(xì)胞進(jìn)行處理和觀察。在所有實(shí)驗(yàn)之前，我們對分離出來的細(xì)胞進(jìn)行了波形蛋白免疫熒光染色。從細(xì)胞免疫熒光可以看出細(xì)胞形態(tài)為長梭形，細(xì)胞核位于細(xì)胞中央，全細(xì)胞有波形蛋白表達(dá)，證明我們分離出

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文22圖3.右美托咪定抑制了TNF-α刺激的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎成纖維樣滑膜細(xì)胞（RA-FLSs）的侵襲、遷移和炎癥反應(yīng)。（A）通過細(xì)胞免疫熒光檢測波形蛋白的表達(dá)，并確定細(xì)胞為RA-FLS。（B）通過RT-qPCR分析DEX對IL-1β，IL-6，MMP-3和MMP-9的mRNA水平的影響。（C）用不同濃度的DEX（62.5nM，125nM，250nM，500nM和1μM）處理RA-FLS24、48和72小時。通過MTT分析了DEX對RA-FLSs活性的影響。（D）通過蛋白免疫印跡檢測DEX對RA-FLS中IL-1β，IL-6，MMP-3和MMP-9蛋白水平的影響。（E）使用Transwell測定法檢測DEX對RA-FLS的侵襲和遷移的影響。所有值均表示為平均值±S.D。DEX，右美托咪定；RA-FLS，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎成纖維樣滑膜細(xì)胞；Con，對照組；*對照組VSTNF-α刺激組；＃TNF-α刺激組VSDEX治療組；＆對照組VSDEX（500nM）單獨(dú)治療組。*P<0.05，**P<0.01，＃P<0.05，##P<0.01,&P<0.05。Fig.3.DEXattenuatesinvasion,migrationandinflammationofRA-FLSsstimulatedbyTNF-α.(A)Vimentinexpressionwasdetectedbycellularimmunofluorescence,andthecellsweredeterminedtobeRA-FLSs.(B)EffectsofDEXonthemRNAlevelsofIL-1β,IL-6,MMP-3andMMP-9wereanalyzedbyRT-qPCR.(C)RA-FLSsweretreatedwithdifferentconcentrationsofDEX(62.5nM,125nM,250nM,500nM,and1μM)for24,48,and72hours.TheeffectofDEXonRA-FLSsactivitywasanalyzedbyMTT.(D)EffectsofDEXontheproteinlevelsofIL-1β,IL-6,MMP-3andMMP-9inRA-FLSsweredetectedbyWesternblot.(E)TranswellassayswereusedtodetecttheimpactofDEXontheinvasionandmigrationofRA-FLSs.Allvaluesareexpressedasthemean±S.D.DEX,dexmedetomidine;RA-FLSs,rheumatoidarthritisfibroblast-likesynoviocytes;Con,controlgr

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]右美托咪啶預(yù)處理對膿毒癥腎損傷大鼠炎性因子和氧化應(yīng)激的影響[J]. 陳裕潔,龔楚鏈,譚芳,周少麗.  南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2015(10)



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