【目的】:評估在大鼠脊髓半切損傷部位共釋放VEGF和NT-3的血管修復與神經(jīng)再生促進作用�！痉椒ā�:1.采用了乳化溶劑揮發(fā)法制備封裝VEGF、NT-3微球（V-NPs、N-NPS）和空白微球（blank PLGA NPs B-NPs）,并觀測微球表征,測得其藥物封包率高及緩釋性能良好;2.大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞（BMSCs）的分離培養(yǎng)及鑒定;3.制備脊髓脫細胞支架（ASCS）及ASCS與BMSCs共培養(yǎng);4.大鼠脊髓損傷動物模型制備;5.實驗動物模型的分組及其分組方法;6.4個實驗組分別于術后第1、8周處死指定數(shù)量大鼠,取損傷部位脊髓,采用免疫熒光染色、HE染色和尼氏體及髓鞘染色觀察其血管生成、神經(jīng)再生、各移植物、宿主組織的結(jié)構整合度、損傷部位空腔大小、損傷部位瘢痕形成情況等;并分別在大鼠術后第3天、1、2、4、6、8周使用BBB運動功能評定量表評定運動行為�！窘Y(jié)果】1.成功制備V-NPS、N-NPS和B-NPS,并測得其表征、包封率及釋放動力學。2.成功培養(yǎng)制備骨髓間充質(zhì)干細胞,并通過培養(yǎng)驗證其多向分化能力。3.成功制備脊髓脫細胞支架及ASCS-BMSCs共培養(yǎng)。通過HE染色后觀察到,... 

【文章來源】：福建醫(yī)科大學福建省

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

通過對RECA1陽性細胞免疫熒光染色后來觀察脊髓內(nèi)血管的變化（綠色），細胞的細胞核用DAPI復染（藍色）

圖 3:運用免疫熒光染色軸突蛋白的特異性標志物 NF-H（綠色），顯示脊髓半切損傷后 8 周各組之間神經(jīng)軸突表達的差異。脊髓損傷/種植區(qū)域的縱切面大致鏡下觀如圖 A-D，圖中方形標注區(qū)在高倍圖像中的顯示分別見圖中相應標注位置，細胞核用 DAPI 復染（藍色）。定量結(jié)果表明，NF-H 陽性細胞百分比在 ABVN 組最高，其次為 ABC 組，對照組最低。6 手術后病變部位的神經(jīng)和星形膠質(zhì)細胞增生情況為確定是否 VEGF165 和 NT-3 的共同配送能提高神經(jīng)元的存活率同時抑制膠質(zhì)瘢痕形成，在術后 8 周，以病灶部位為中心對神經(jīng)元和膠質(zhì)纖維酸性蛋白進行雙重免疫熒光染色。病變部位的免疫熒光圖像取自低倍顯微鏡，在圖 4A-D 顯示。不同治療組大鼠神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細胞增生的情況在圖 4A-D 后的高倍放大鏡圖像中顯示。在假手術組，雙標記的組織表現(xiàn)出正常的 NeuN 陽性神經(jīng)元外觀和膠質(zhì)纖維酸性蛋白陽性星形膠質(zhì)細胞的規(guī)則排列，對照組可見明顯的膠質(zhì)瘢痕及神經(jīng)元存活的缺乏，相比假手術組，在 ABVN 組神經(jīng)元較小，密度較稀疏，然而，它們的大小和密度比 ABC 組要好得多，且 ABC 組比 ABVN 組 GFAP 陽性星形膠質(zhì)細

22圖 4：圖像顯示術后 8 周取各組大鼠脊髓病變部位進行雙重免疫熒光染色（NeuN 神經(jīng)元，紅色）、GFAP（星形膠質(zhì)細胞、綠色）的區(qū)別。病變部位的縱切面大致鏡下觀如圖 A-D，為了更好的顯示 NeuN 和 GFAP 的表達，圖中方形標注區(qū)在高倍圖像中的顯示分別見圖中相應標注位置，細胞核用 DAPI 復染（藍色）。NeuN 陽性神經(jīng)元的定量結(jié)果表明，4 組間兩兩比較的差異有統(tǒng)計學意義。（E）對 GFAP 百分比的定量結(jié)果顯示，陽性膠質(zhì)瘢痕在對照組和 ABC組高于 ABVN 組，差異有統(tǒng)計學意義。7 手術后病變部位空洞的形成和髓鞘再生情況通過 HE 染色后圖像，測量手術后脊髓內(nèi)空洞的大小（使用 4×物鏡，如圖

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3308502