目的:探討浸提時(shí)間、乙酸濃度及料液比對鼠尾腱膠原提取的影響,建立并優(yōu)化鼠尾腱膠原的提取工藝,提高膠原提取效率。構(gòu)建復(fù)合重組人骨形態(tài)發(fā)生蛋白（rh BMP-2）的膠原/殼聚糖-明膠微球雙緩釋體系,并評價(jià)其緩釋rh BMP-2的效果,及重組人骨形態(tài)發(fā)生蛋白（rh BMP-2）促進(jìn)骨缺損修復(fù)的能力,為骨組織工程促進(jìn)骨缺損的修復(fù)提供新的思路。方法:由于各種急慢性損傷、炎癥、腫瘤、先天畸形等因素造成的骨缺損的修復(fù)是亟待解決的重大臨床難題之一,骨組織工程支架為誘導(dǎo)骨缺損區(qū)的骨再生提供了一個(gè)嶄新的治療途徑。前期研究證實(shí)重組人骨形態(tài)發(fā)生蛋白（rh BMP-2）具有良好的誘導(dǎo)骨再生能力,但是rh BMP-2突釋效應(yīng)顯著且半衰期較短,與載體結(jié)合后在體內(nèi)容易失去生物活性而嚴(yán)重影響其誘導(dǎo)骨再生能力。本研究選取生物活性良好的膠原及殼聚糖作為原材料制備成水凝膠載體,并制備緩釋效果良好的明膠微球,將微球包埋于水凝膠中構(gòu)成雙緩釋體系。對原材料膠原蛋白的提取工藝進(jìn)行了優(yōu)化,選取健康SD大鼠鼠尾,采用酸溶法提取鼠尾腱膠原,計(jì)算不同浸提時(shí)間、乙酸濃度及料液的膠原提取率,利用正交試驗(yàn)判斷浸提時(shí)間、乙酸濃度及料液比等影響因素的... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
英文縮略詞
第1章 緒論
    1.1 研究背景
    1.2 骨組織工程的研究現(xiàn)狀
    1.3 本課題主要研究內(nèi)容
第2章 膠原蛋白的提取、純化及表征
    2.1 材料與儀器
        2.1.1 試劑
        2.1.2 儀器
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    2.2 方法
        2.2.1 膠原蛋白的提取與純化工藝
        2.2.2 提取工藝單因素試驗(yàn)
        2.2.3 十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）驗(yàn)證膠原蛋白完整性
        2.2.4 傅里葉紅外透射光譜分析膠原結(jié)構(gòu)完整性
        2.2.5 氨基酸含量測定
        2.2.6 單寧酸沉淀試驗(yàn)驗(yàn)證膠原蛋白降解程度
        2.2.7 膠原凝膠的制備
        2.2.8 掃描電子顯微鏡觀察膠原交聯(lián)前后的微觀結(jié)構(gòu)
        2.2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 膠原樣品觀察
        2.3.2 提取工藝單因素試驗(yàn)
        2.3.3 正交試驗(yàn)結(jié)果
        2.3.4 十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠（SDS-PAGE）電泳實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證膠原蛋白完整性
        2.3.5 單寧酸沉淀試驗(yàn)驗(yàn)證膠原蛋白降解程度
        2.3.6 傅里葉變換紅外透射光譜（FT-IR）分析粗提物結(jié)構(gòu)完整性
        2.3.7 膠原氨基酸含量測定
        2.3.8 膠原凝膠的制備
        2.3.9 膠原交聯(lián)前后的掃描電鏡圖
    2.4 討論
第3章 膠原/殼聚糖-明膠微球復(fù)合支架的制備及表征
    3.1 材料與儀器
        3.1.1 試劑
        3.1.2 儀器
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    3.2 方法
        3.2.1 明膠微球的制備（乳化交聯(lián)法）
        3.2.2 CC水凝膠及CC-GMS復(fù)合水凝膠的制備
        3.2.3 CC-GMS復(fù)合支架及GMS的微觀結(jié)構(gòu)表征
        3.2.4 CC水凝膠成膠時(shí)間的測定
        3.2.5 CC水凝膠降解性的測定
        3.2.6 CC水凝膠緩釋rhBMP-2 的測定
        3.2.7 大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外分離、培養(yǎng)與擴(kuò)增
        3.2.8 流式細(xì)胞儀測定BMSCs細(xì)胞周期
        3.2.9 BMSCs表明標(biāo)記物的鑒定
        3.2.10 誘導(dǎo)BMSCs向成骨細(xì)胞分化
        3.2.11 誘導(dǎo)BMSCs向成脂細(xì)胞分化
        3.2.12 BMSCs在CC水凝膠支架中細(xì)胞活性的檢測
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 GMS粒徑與外觀及CC水凝膠制備
        3.3.2 CC水凝膠支架成膠時(shí)間的測定
        3.3.3 CC-GMS支架的降解性試驗(yàn)
        3.3.4 CC-GMS支架的體外釋放試驗(yàn)
        3.3.5 BMSCs的形態(tài)學(xué)觀察
        3.3.6 BMSCs細(xì)胞周期
        3.3.7 BMSCs表面標(biāo)記物的表達(dá)
        3.3.8 BMSCs成骨、成脂誘導(dǎo)分化鑒定
        3.3.9 BMSCs在CC水凝膠支架中的生物學(xué)活性
    3.4 討論
第4章 緩釋BMP-2 的CC-GMS支架應(yīng)用于骨缺損的修復(fù)
    4.1 材料與儀器
        4.1.1 試劑
        4.1.2 儀器
        4.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    4.2 方法
        4.2.1 載有rhBMP-2 的CC-GMS復(fù)合支架的制備
        4.2.2 原位動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
        4.2.3 術(shù)后大體觀察及動(dòng)物處死取材
        4.2.4 軟X-ray檢查及螺旋CT三維重建
        4.2.5 Micro CT檢查
        4.2.6 組織學(xué)檢查
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 大體觀察結(jié)果
        4.3.2 軟X-ray檢測結(jié)果
        4.3.3 螺旋CT三維重建
        4.3.4 Micro CT結(jié)果
        4.3.5 骨礦密度和骨礦含量結(jié)果
        4.3.6 組織學(xué)檢查結(jié)果
    4.4 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡介及在攻讀碩士期間所取得的科研成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[4]牙髓干細(xì)胞在組織工程研究中的應(yīng)用[J]. 商麗娟,吳巖.  中國組織工程研究. 2013(19)
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本文編號：3299889