目的:近年來在脊髓損傷修復(fù)方面,干細(xì)胞/組織工程支架移植受到了研究者的廣泛關(guān)注�；谏窠�(jīng)干細(xì)胞在疾病損傷狀態(tài)下具有自我更新并向神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞、少突膠質(zhì)細(xì)胞分化的能力,其對促進(jìn)脊髓損傷的修復(fù)有著獨(dú)特作用。本研究旨在探究:（1）包含重組SHH腺病毒的纖維蛋白膠（Fribin glue）緩釋支架（FG-SHH）對體外培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞（Neural stem cells,NSCs）增殖與分化的影響;（2）構(gòu)建大鼠脊髓損傷（Spinal Cord Injury,SCI）動物模型,移植FG-SHH緩釋支架,觀察其對內(nèi)源性NSCs生物學(xué)特性的影響,評價(jià)其對大鼠脊髓損傷修復(fù)的效果。方法:（1）懸浮培養(yǎng)法在體外分離、培養(yǎng)NSCs,免疫熒光方法鑒定其表面標(biāo)志物。（2）以重組腺病毒作為SHH基因的載體,將其以合適濃度注入纖維蛋白膠支架內(nèi),構(gòu)建重組SHH腺病毒纖維蛋白膠緩釋支架,并在掃描電鏡下觀察其微觀結(jié)構(gòu),免疫熒光法和免疫印跡法檢測支架緩釋效果。（3）觀察構(gòu)建的緩釋支架對NSCs增殖與分化的影響;實(shí)驗(yàn)分組:FG-SHH組、單純NSCs組、單純重組SHH腺病毒轉(zhuǎn)染組（SHH）及單純纖維蛋白膠支架組（FG... 

【文章來源】：江蘇大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

A、B、C分別為白光下第1、3、7d神經(jīng)干細(xì)胞的形態(tài)

重組 SHH 腺病毒纖維蛋白緩釋支架在脊髓損傷中的應(yīng)用Fig 1.1 Culture of NSCs，（A）、（B）and（C）are the morphology of neural stem cells onday 1, 3 and 7 under microscope. bar = 50 μm.3.2 NSCs 的表面標(biāo)志物鑒定取第三代神經(jīng)干細(xì)胞，免疫熒光染色檢測顯示細(xì)胞球內(nèi)的細(xì)胞均表達(dá)神經(jīng)干細(xì)胞的特異性標(biāo)志物蛋白 Nestin 和 SOX-2。提示分離培養(yǎng)的細(xì)胞為神經(jīng)干細(xì)胞。

16) 回收一抗，用TBST洗膜3次，每次5-10 min；17) TBST稀釋二抗（1:500），室溫輕搖結(jié)合1 h；18) 回收二抗，用TBST洗膜3次，每次10 min；19) 瀝去多余的TBST，熒光發(fā)光，掃描并記錄結(jié)果，Image J軟件析吸光度值。免疫熒光步驟已在第一章中闡述。3 結(jié)果3.1 重組 SHH 腺病毒纖維蛋白緩釋支架表面結(jié)構(gòu)將重組 SHH 腺病毒融于纖維蛋白膠后，得到包含重組 SHH 腺病毒纖維蛋白緩釋支架。肉眼可見支架外觀呈半透明，質(zhì)地柔韌；掃描電鏡下可見其呈現(xiàn)多孔網(wǎng)狀交聯(lián)結(jié)構(gòu)。

【參考文獻(xiàn)】：
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博士論文
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本文編號：3278603