發(fā)布時(shí)間：2021-07-02 10:50

　　骨肉瘤是發(fā)病率最高的原發(fā)惡性骨腫瘤,常見于兒童和青少年,具有局部侵犯和早期肺轉(zhuǎn)移的趨勢(shì)。通過(guò)使用新輔助化療聯(lián)合手術(shù)的治療方案,已經(jīng)將骨肉瘤患者的5年生存率提高到了60%-80%,但在過(guò)去的近40年間并未得到進(jìn)一步改善。尤其是對(duì)于復(fù)發(fā)和發(fā)生肺轉(zhuǎn)移的患者,目前尚無(wú)有效的治療手段,預(yù)后極差。同時(shí),目前臨床的一線化療藥,如甲氨蝶呤、阿霉素、順鉑、異環(huán)磷酰胺等毒副作用很大,且耐藥的情況常有發(fā)生,療效有限。因此,尋找新型、高效和安全的治療方案是目前亟待解決的問(wèn)題。免疫治療被認(rèn)為是除手術(shù)、化療、放療以外的第四大治療手段。其中,過(guò)繼細(xì)胞輸注治療（ACT）是最有前景的免疫治療方案之一,已經(jīng)在白血病的研究中取得了顯著的成果。包括NK細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和T細(xì)胞在內(nèi)的各種免疫細(xì)胞均被研究應(yīng)用于ACT中,尤其是T細(xì)胞,因其在抗腫瘤免疫效應(yīng)中扮演著重要角色,成為ACT的首選效應(yīng)細(xì)胞。然而,包括骨肉瘤在內(nèi)的多數(shù)實(shí)體腫瘤,都缺少特異性、高表達(dá)的免疫治療靶點(diǎn),成為了ACT應(yīng)用的一個(gè)主要限制因素。γδT細(xì)胞占外周血T細(xì)胞的1～10%,因其能夠直接識(shí)別腫瘤細(xì)胞并且不依賴MHC的限制而被認(rèn)為是充滿前景的效應(yīng)T細(xì)胞。活化的γδT細(xì)... 

【文章來(lái)源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：121 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

VPA和ZOL對(duì)骨肉瘤細(xì)胞系的增殖抑制作用

PBMCs經(jīng)ZOL+IL-2刺激后,γδT細(xì)胞比例逐漸升高,從day 1的3%左右到day14的85%左右,經(jīng)過(guò)磁珠分選后,最終純度達(dá)到95%以上(圖1.2)。2.3.2.3 VPA聯(lián)合ZOL協(xié)同增強(qiáng)γδT細(xì)胞殺傷骨肉瘤效應(yīng)

為了明確VPA與ZOL致敏γδT細(xì)胞殺傷骨肉瘤細(xì)胞是否具有協(xié)同作用,本實(shí)驗(yàn)以4種骨肉瘤細(xì)胞系HOS、U2OS、MG63和Saos2為靶細(xì)胞,γδT細(xì)胞為效應(yīng)細(xì)胞,E:T=10:1,共培養(yǎng)3 h。如圖1.3,體外共培養(yǎng)的顯微鏡攝影顯示,γδT細(xì)胞與無(wú)預(yù)處理或只有VPA預(yù)處理的骨肉瘤共培養(yǎng)后,并沒(méi)有明顯的殺傷腫瘤效應(yīng),只有在ZOL作用后的γδT細(xì)胞才能顯著殺傷骨肉瘤細(xì)胞,而VPA聯(lián)合ZOL處理組相比ZOL單處理組,其殺傷作用顯著增強(qiáng),幾乎徹底殺滅了骨肉瘤細(xì)胞。進(jìn)一步,MTS檢測(cè)結(jié)果(圖1.4)顯示,ZOL能夠致敏γδT細(xì)胞殺傷骨肉瘤細(xì)胞,而VPA無(wú)明顯此作用,但VPA聯(lián)合ZOL組能夠進(jìn)一步增強(qiáng)γδT細(xì)胞的殺傷效應(yīng)。為明確VPA和ZOL聯(lián)合作用是否有協(xié)同效應(yīng),我們使用周氏公式計(jì)算聯(lián)合指數(shù)(64)。聯(lián)合指數(shù)(CI)廣泛被用于計(jì)算兩種作用的協(xié)同效應(yīng),當(dāng)CI<0.9,表明兩種作用方式產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng);當(dāng)CI=0.9-1.1,表明僅僅是疊加效應(yīng);當(dāng)CI>1.1,則表明拮抗作用。我們使用周氏公式計(jì)算了多種濃度下的VPA和ZOL誘導(dǎo)γδT細(xì)胞殺傷骨肉瘤效應(yīng)的CI值(圖1.5)。結(jié)果顯示,在所有骨肉瘤細(xì)胞系中,不同濃度下的VPA和ZOL對(duì)應(yīng)的CI值均小于0.9。尤其當(dāng)VPA=2 mM,ZOL=4μM,聯(lián)合指數(shù)分別為:HOS 0.415,U2OS0.3408,MG63 0.3903,Saos2 0.5333,表明具有顯著的協(xié)同效應(yīng)。為檢測(cè)不同效靶比下的抗骨肉瘤細(xì)胞效應(yīng),我們使用1 mM VPA和2μM ZOL預(yù)處理骨肉瘤細(xì)胞系,然后分別以E:T=10:1/5:1/1:1將γδT細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)3 h,MTS結(jié)果顯示,當(dāng)E:T達(dá)到5:1時(shí),就存在顯著的協(xié)同效應(yīng)(圖1.6)。圖1.4不同濃度下VPA聯(lián)合ZOL協(xié)同致敏γδT細(xì)胞殺傷骨肉瘤效應(yīng)


本文編號(hào)：3260330