發(fā)布時(shí)間：2021-06-28 08:57

　　目的:觀察蛋白激酶樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶（RNA-activated protein kinase-like endoplasmic reticulum kinase,PERK）通路在焦脫鎂葉綠酸-a甲酯介導(dǎo)的光動(dòng)力療法（pyropheophorbide-a methyl ester-mediated photodynamic therapy,MPPa-PDT）誘導(dǎo)人骨肉瘤HOS細(xì)胞凋亡?自噬中的作用,并探討阻滯PERK通路增強(qiáng)人骨肉瘤HOS細(xì)胞對MPPa-PDT敏感性的影響及機(jī)制?方法:MPPa-PDT處理人骨肉瘤HOS細(xì)胞后以Hoechst染色觀察胞核形態(tài)學(xué)變化。以空白組、MPPa組、LED組為對照組,以MPPa-PDT處理組（MPPa-PDT）、MPPa-PDT聯(lián)合PERK通路抑制劑GSK2656157處理組（MPPa-PDT+GSK2656157）、MPPa-PDT聯(lián)合自噬抑制劑Bafilomycin A1處理組（MPPa-PDT+Bafilomycin A1）、MPPa-PDT聯(lián)合siRNAp21（MPPa-PDT+siRNAp21）為實(shí)驗(yàn)組,以Western blot檢測PERK通路... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：45 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

熒光顯微鏡觀察各組細(xì)胞凋亡形態(tài)變化(Hoechst染色)

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文Figure 1. Typical morphological changes of apoptosis in HOS cells by MPPa-PDT wereobserved using a fluorescence microscopy (Hoechst staining)流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果提示，MPPa-PDT 處理 HOS 細(xì)胞 12 h 后 MPPa-PDT 組凋亡率為（30.70±2.28）%，顯著高于空白組（9.81±1.10）%、MPPa 組（10.69±1.24）%、LED 組（10.65±1.65）%（P<0.05，圖 2A、B）。Western blot 檢測結(jié)果顯示：空白組 MPPa 組、LED 組凋亡相關(guān)蛋白Cleaved-caspase3、Cleaved-PARP 表達(dá)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P > 0. 05) ；MPPa-PDT處理 HOS 細(xì)胞 3、6、12 h 后，Cleaved-caspase3、Cleaved-PARP 表達(dá)呈升高趨勢，與各對照組比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P < 0. 05, 圖 2C、D)。

圖 4 Western blot 檢測 MPPa-PDT 誘導(dǎo) PERK、p-PERK、ATF4、CHOP 蛋白表達(dá)Figure 4.The expressions of PERK, p-PERK, ATF4 and CHOP induced by MPPa-PDT weredetected by Western blotting. (Aand B)At 3 h, 6 h and 12 h, whole-cell lysate was harvestedfor the analysis of the changes of proteins expressions including PERK, p-PERK, ATF4 andCHOP by Western blotting. The values are means of 3 independent experiments ± SD. a: P <0.05 versus groups of control, Mppa and LED.2.3 MPPa-PDT誘導(dǎo)人骨肉瘤HOS細(xì)胞出現(xiàn)自噬小泡及自噬相關(guān)蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、P62 的表達(dá)透射電鏡結(jié)果顯示：MPPa-PDT 處理 HOS 細(xì)胞后，胞內(nèi)出現(xiàn)大量雙層膜的囊泡狀結(jié)構(gòu)，即為自噬小泡。其余各對照組未見自噬小泡大量出現(xiàn)，如黑色箭頭所示（圖 5A）。Western blot 檢測結(jié)果顯示：空白組、MPPa 組、LED 組 LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、P62表達(dá)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；MPPa-PDT 處理 HOS 細(xì)胞 3、6、12 h 后，

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3254018