目的:臨床醫(yī)學(xué)對大段周圍神經(jīng)缺損的修復(fù)有迫切需求,然而目前構(gòu)建的神經(jīng)移植物的血管化問題是困擾大段周圍神經(jīng)缺損修復(fù)的重要瓶頸之一。本項目在前期構(gòu)建組織工程化周圍神經(jīng)的基礎(chǔ)上,認為移植物早期血管化對組織工程化周圍神經(jīng)在體內(nèi)存活起重要作用,提出促血管化組織工程化周圍神經(jīng)促進大段周圍神經(jīng)缺損修復(fù)的新方法,即利用攜帶血管內(nèi)皮生長因子165基因（VEGF165）的重組腺病毒轉(zhuǎn)染自體內(nèi)皮祖細胞（EPCs）,并與自體脂肪干細胞（ADSCs）誘導(dǎo)后的類許旺細胞共同作為種子細胞,利用本課題組改良制備的同種異體脫細胞神經(jīng)支架材料作為載體,構(gòu)建促血管化組織工程化周圍神經(jīng),并修復(fù)大鼠坐骨神經(jīng)大段缺損（2cm）,通過大體觀察、神經(jīng)電生理檢測、組織學(xué)觀察等方法評估神經(jīng)修復(fù)情況。探討基于VEGF165基因及EPCs促血管生成作用構(gòu)建的神經(jīng)移植物對動物體內(nèi)大段神經(jīng)缺損修復(fù)的影響。方法:1、取SD大鼠,無菌分離雙側(cè)脛骨及股骨,采用骨髓EPCs分離液分離大鼠EPCs并進行鑒定。采用酶消化法獲取大鼠ADSCs,并采用經(jīng)典誘導(dǎo)方法將其向許旺細胞進行誘導(dǎo),并進行鑒定。將上述兩種細胞按照不同接種比例進行共培養(yǎng)（1:2,1:1及2:... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：102 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１．１?ＥＰＣｓ培養(yǎng)及鑒定

為了觀察大鼠ＥＰＣｓ對類ＳＣｓ存活的影響，我們采用ＣＣＫ－８檢測了共培養(yǎng)??組（細胞接種比例為１：１）及對照組類ＳＣｓ于培養(yǎng)ｌｄ、３ｄ、５ｄ及７ｄ的生長情況；??結(jié)果（圖１．３Ｂ）表明：培養(yǎng)Ｉｄ時兩組細胞ＯＤ值比較無明顯統(tǒng)計學(xué)差異（尸＞０．０５），??而培養(yǎng)３ｄ、５ｄ及７ｄ，共培養(yǎng)Ｉ且細胞ＯＤ值明顯襄于對照組（尸＜０．０５），表明大??鼠ＥＰＣｓ能明顯促進類ＳＣｓ存活、増殖８??＾?０．８－１?Ｂ?２．５ｎ?＿??＾?ｉ：：ｘ：ａ?ｃｏｎｔｒｏｌ?＊??Ｍ?＊?Ｉ２＇０＇?ｒａｃ〇＇ｃｕｌｔｕｒｅ?＊?｜??Ｍｌ??名?ｌｌｌｌｉｌ?ＭＭ?｜?議?Ｓ?＿?ｆｔ??ｕ?ｎ．?＝?Ｓ?０．５－?ｍ？?ｌ?：：ｉ?ｍ?Ｘ??ｒ．圓國圍?＾〇ｗｊｕｉ－ｉｉ??彳?ｎｎｌ＾ａ?００?ｔ?ｔ?了?Ｔ??２：ｌ?１：１?１：２?Ｔｉｍｅ（ｄ）??圖１．３大鼠ＥＰＣｓ對類ＳＣｓ存活的影響（Ａ）不同細胞接種比例下ＥＰＣｓ對類??ＳＣｓ存活的影響；（Ｂ）按１：１接種比例下，ＥＰＣｓ能促進類ＳＣｓ增殖。（＊尸＜０．０５）??１．２．?３．?３大鼠ＥＰＣｓ對類ＳＣｓ功能表達的影響及其可能機制分析??共培養(yǎng)組、陰性對照組及陽性對照組Ｓ－１００、ＧＦＡＰ棊因表達情況見圖１．４Ａ。??結(jié)果顯示，與陰性對照組相比，共培養(yǎng)組及陽性對照組Ｓ－１００及ＧＦＡＰ基囡表達??均升高，其差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（Ｐ＜〇．〇５）；且與陽性對組組相比，共培養(yǎng)組??上述基固表達亦升窗，其差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（尸＜０．０５）。??共培養(yǎng)組、陰性對照組及陽性對照組Ｓ－１００、ＧＦＡＰ蛋白表達情況見圖１．４Ｂ。??結(jié)果顯示

為了觀察大鼠ＥＰＣｓ對類ＳＣｓ存活的影響，我們采用ＣＣＫ－８檢測了共培養(yǎng)??組（細胞接種比例為１：１）及對照組類ＳＣｓ于培養(yǎng)ｌｄ、３ｄ、５ｄ及７ｄ的生長情況；??結(jié)果（圖１．３Ｂ）表明：培養(yǎng)Ｉｄ時兩組細胞ＯＤ值比較無明顯統(tǒng)計學(xué)差異（尸＞０．０５），??而培養(yǎng)３ｄ、５ｄ及７ｄ，共培養(yǎng)Ｉ且細胞ＯＤ值明顯襄于對照組（尸＜０．０５），表明大??鼠ＥＰＣｓ能明顯促進類ＳＣｓ存活、増殖８??＾?０．８－１?Ｂ?２．５ｎ?＿??＾?ｉ：：ｘ：ａ?ｃｏｎｔｒｏｌ?＊??Ｍ?＊?Ｉ２＇０＇?ｒａｃ〇＇ｃｕｌｔｕｒｅ?＊?｜??Ｍｌ??名?ｌｌｌｌｉｌ?ＭＭ?｜?議?Ｓ?＿?ｆｔ??ｕ?ｎ．?＝?Ｓ?０．５－?ｍ？?ｌ?：：ｉ?ｍ?Ｘ??ｒ．圓國圍?＾〇ｗｊｕｉ－ｉｉ??彳?ｎｎｌ＾ａ?００?ｔ?ｔ?了?Ｔ??２：ｌ?１：１?１：２?Ｔｉｍｅ（ｄ）??圖１．３大鼠ＥＰＣｓ對類ＳＣｓ存活的影響（Ａ）不同細胞接種比例下ＥＰＣｓ對類??ＳＣｓ存活的影響；（Ｂ）按１：１接種比例下，ＥＰＣｓ能促進類ＳＣｓ增殖。（＊尸＜０．０５）??１．２．?３．?３大鼠ＥＰＣｓ對類ＳＣｓ功能表達的影響及其可能機制分析??共培養(yǎng)組、陰性對照組及陽性對照組Ｓ－１００、ＧＦＡＰ棊因表達情況見圖１．４Ａ。??結(jié)果顯示，與陰性對照組相比，共培養(yǎng)組及陽性對照組Ｓ－１００及ＧＦＡＰ基囡表達??均升高，其差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（Ｐ＜〇．〇５）；且與陽性對組組相比，共培養(yǎng)組??上述基固表達亦升窗，其差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（尸＜０．０５）。??共培養(yǎng)組、陰性對照組及陽性對照組Ｓ－１００、ＧＦＡＰ蛋白表達情況見圖１．４Ｂ。??結(jié)果顯示

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3251926