目的:（1）檢測lnc RNA CRNDE在骨肉瘤組織及細(xì)胞系中的表達(dá)水平,分析表達(dá)水平。（2）設(shè)計(jì)并篩選出用于轉(zhuǎn)染的高效靶向沉默骨肉瘤細(xì)胞系lnc RNA CRNDE的si RNA序列并以此靶向沉默lnc RNA CRNDE,研究其對骨肉瘤細(xì)胞增殖、凋亡、細(xì)胞周期、遷移、侵襲等腫瘤生物學(xué)行為和荷瘤裸鼠皮下移植瘤生長的影響。（3）檢測啟動(dòng)子SP1表達(dá)增高或降低對Lnc RNA的表達(dá)的影響。（4）研究lnc RNA CRNDE在骨肉瘤細(xì)胞中的分子機(jī)制,為將來骨肉瘤靶向治療研究提供理論基礎(chǔ)。方法:（1）應(yīng)用q RT-PCR技術(shù)檢測lnc RNA CRNDE在骨肉瘤組織標(biāo)本和相應(yīng)瘤旁組織中的表達(dá)水平,及骨肉瘤細(xì)胞系和人正常成骨細(xì)胞系中的表達(dá)水平,并應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)模型處理數(shù)據(jù)。（2）應(yīng)用CCK8和細(xì)胞平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測骨肉瘤細(xì)胞系增殖能力;通過流式細(xì)胞儀Annexin V-FITC/PI染色細(xì)胞凋亡檢測試劑盒檢測骨肉瘤細(xì)胞系的凋亡水平;通過流式細(xì)胞儀PI染色細(xì)胞周期檢測試劑盒檢測骨肉瘤細(xì)胞系細(xì)胞周期的變化;通過Transwell遷移實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測骨肉瘤細(xì)胞系的... 

【文章來源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

骨肉瘤細(xì)胞系和組織中的CRNDE表達(dá)

SP1調(diào)控OS的CRNDE表達(dá)

27 3.CRNDE 對骨肉瘤細(xì)胞增殖的影響A）用非特異性 siRNA，si-CRNDE1 或 si-CRNDE2 轉(zhuǎn)染 48 小時(shí)后，UNNG / HOS 和 MG63 細(xì)胞中 CRNDE 的相對表達(dá)水平。B）CCK8 測定用于測定 si-CRNDE1 和 si-CRNDE2 轉(zhuǎn)染的 MNNG/HOS， U20S 細(xì)胞的細(xì)胞活力。C）細(xì)胞集落形成實(shí)驗(yàn)測定以測定 si-CRNDE2 轉(zhuǎn)染的 MNNG/HOS，M20S 細(xì)胞和對照細(xì)胞的克隆能力。D）EdU 染色測定 si-CRNDE2-轉(zhuǎn)染的 MNNG/HOS，MG63 和 U20S 細(xì)胞。紅色，EdU 染色分裂細(xì)胞; 藍(lán)色，Honchest33342 染色核。放大倍數(shù)×例尺=100μm。 所有實(shí)驗(yàn)均至少獨(dú)立重復(fù) 3 次，平均值±SD。 * P <0* P <0.01

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]宮頸癌中長鏈非編碼RNA CRNDE表達(dá)及其臨床意義[J]. 韓懿,勞美瓊,雷巧如,李艷娜.  中國腫瘤臨床. 2015(14)



本文編號：3247707