周圍神經(jīng)損傷修復(fù)仍然是臨床的研究熱點(diǎn)之一。周圍神經(jīng)具有一定的再生能力,神經(jīng)損傷后相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的激活與再生相關(guān)基因的調(diào)控是神經(jīng)元能存活、軸突再生和功能恢復(fù)的關(guān)鍵。在此過程中micro RNA（miRNA）、外泌體等都發(fā)揮重要作用。miRNA可以調(diào)控基因的表達(dá),miRNA通過靶向目標(biāo)mRNA分子3’端非翻譯區(qū)（3’-UTR）,抑制mRNA翻譯或使其降解,負(fù)調(diào)控相關(guān)基因的表達(dá)。多種miRNA對(duì)神經(jīng)損傷后調(diào)控再生相關(guān)基因密切相關(guān)。外泌體（Exo）是天然的納米級(jí)藥物載體,可以介導(dǎo)RNA等信號(hào)分子在細(xì)胞間傳遞,將遺傳物質(zhì)帶入靶細(xì)胞,調(diào)控其相關(guān)基因的表達(dá)。目的:構(gòu)建荷載miRNA-21-5p工程外泌體,并探討其對(duì)DRG神經(jīng)元作用及機(jī)制。為有效操控神經(jīng)再生相關(guān)基因促進(jìn)周圍神經(jīng)損傷修復(fù)提供實(shí)驗(yàn)研究基礎(chǔ)。方法:（1）分離提取骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）源性外泌體;（2）透射電鏡鑒定外泌體;（3）納米顆粒分析儀（NTA）測定外泌體粒徑、濃度、zeta電位;（4）電穿孔法將外源性miR-21-5p/miR-NC加載到外泌體構(gòu)建工程外泌體（5）Apogee超靈敏納米流式細(xì)胞儀測定miRNA的加載率;（6）體外... 

【文章來源】：海南醫(yī)學(xué)院海南省

【文章頁數(shù)】：86 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

本課題研究示意圖

圖2-2：透射電鏡下的Exo

13圖2-4圖2-4：電穿孔將miR-21-5p導(dǎo)入外泌體時(shí)的荷載率(X±SD,n=5）。Fig.2-4：Loadingefficiencyofmir-21-5pintroducedintoexosomesbyelectroporation.(X±SD,n=5）注：***p<0.001;4討論本實(shí)驗(yàn)所用外泌體的提取培養(yǎng)條件：取凍存的第五代BMSCs，復(fù)蘇后在37℃5%的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，傳代2次擴(kuò)增至8個(gè)T175CM2培養(yǎng)瓶，提取外泌體進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。我們課題組采用超濾加超離法提取外泌體，提取時(shí)間明顯縮短，前期試驗(yàn)已對(duì)同樣方法所提取Exo進(jìn)行蛋白免疫印跡、電鏡、NTA進(jìn)行驗(yàn)證，證實(shí)提取無符合外泌體的特征。本實(shí)驗(yàn)在前期試驗(yàn)基礎(chǔ)上，應(yīng)用透射電鏡及NTA對(duì)所提取外泌體進(jìn)行鑒定。我們探討了電穿孔法將外源性miR-21-5p導(dǎo)入BMSCs源性exosomes中可行性。我所用帶熒光基團(tuán)的miRNA，導(dǎo)入不帶熒光基團(tuán)外泌體，通過Apogee超靈敏納米流式細(xì)胞儀激光激發(fā)后，測定帶熒光和不帶熒光的外泌體，比較后獲得加載率。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]一種綠色熒光蛋白標(biāo)記的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞源性外泌體的構(gòu)建及鑒定[J]. 任瑞,譚曉紅,魯亞成,劉輝,張顯芳,付媛,黃奎,黃奕弟,馬志健,易西南.  神經(jīng)解剖學(xué)雜志. 2017(02)
[2]Hoechst33342/PI雙染法和TUNEL染色技術(shù)檢測神經(jīng)細(xì)胞凋亡的對(duì)比研究[J]. 楊細(xì)飛,賀春娥,湯瑞華,田生禮,劉建軍.  癌變.畸變.突變. 2014(03)
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博士論文
[1]Exosomes作為藥物載體的功能化研究[D]. 朱延亮.東南大學(xué) 2017
[2]Non-coding RNAs調(diào)控DRG神經(jīng)元參與神經(jīng)再生的機(jī)制研究[D]. 周松林.蘇州大學(xué) 2014
[3]牛分枝桿菌Mb1514基因的原核表達(dá)及功能分析[D]. 尹曉敏.中國農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013



本文編號(hào)：3243499