背景與目的:疼痛是癌癥患者最常見(jiàn)的癥狀,流行病學(xué)調(diào)查表明,近90%的癌癥患者在病程中都有疼痛的發(fā)生。盡管按照世界衛(wèi)生組織（WHO）于1982年提出的的"疼痛三階梯療法"治療癌痛,仍有約45%的癌癥患者其疼痛不能得到有效控制。骨癌痛是嚴(yán)重的難治性癌性疼痛之一,嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量,因此研究其機(jī)制,尋找有效的鎮(zhèn)痛方法,具有重要理論價(jià)值和臨床意義。研究發(fā)現(xiàn),脊髓背角 N-甲基-D-天冬氨酸受體（N-methyl-D-aspartatereceptor,NMDAR）在包括骨癌痛在內(nèi)的多種疼痛中起重要作用。NMDAR激活后,鈣離子內(nèi)流,繼而激活多條細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,引起cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白（cAMP response element binding protein,CREB）絲氨酸-133 位點(diǎn)（Ser-133）磷酸化,啟動(dòng)其下游多種疼痛相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄,從而使其信號(hào)持續(xù)發(fā)揮作用,在疼痛的中樞敏化過(guò)程中起重要作用。最近有研究發(fā)現(xiàn),cAMP調(diào)節(jié)的轉(zhuǎn)錄共激活因子1（cAMP-regulated transcriptional co-activator 1,CRTC1）是 CREB 調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄所必... 

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１細(xì)胞復(fù)蘇后１０分鐘（Ａ：ｘ１〇〇；Ｂ：ｘ２〇〇）??ＮＣＴＣ?２４７２，，

ＮＣＴＣ?２４７２纖維肉瘤細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，星形，多突觸??２．１．３細(xì)胞計(jì)數(shù)??（１）按細(xì)胞傳代步驟（１）?－?（４）獲得細(xì)胞沉淀。??（２）加入少許最小必須培養(yǎng)基（ａ－ｍｉｎｉｍａｌ?ｅｓｓｅｎｃｅ?ｍｅｄｉａ，?ａ－ＭＥＭ），用滴管輕??輕吹打混勻細(xì)胞懸液。??（３）酒精棉球擦洗計(jì)數(shù)板和蓋玻片后用擦鏡紙擦干，將蓋玻片覆蓋于計(jì)數(shù)板上，??稍稍移向一側(cè)，露出計(jì)數(shù)板臺(tái)面少許。??（４）用滴管巧巧吹打細(xì)胞懸液后，立即從蓋玻片邊緣滴入細(xì)胞懸液１０叫，使之??充滿(mǎn)蓋玻片與計(jì)數(shù)板之間的間隙。??（５）將計(jì)數(shù)板置于光學(xué)顯微鏡下觀察，可見(jiàn)細(xì)胞均勻分布。??（６）計(jì)數(shù)四大格內(nèi)的細(xì)胞量，壓中線者只記左側(cè)和上方的細(xì)胞，右側(cè)和下方不??計(jì)算在內(nèi)。（見(jiàn)圖３）??（７）按公式計(jì)算：細(xì)胞數(shù)／毫升＝４大格細(xì)胞總數(shù)／４Ｘ１００００。??

圖３細(xì)施計(jì)數(shù)（ｘｌＯＯ）??置于計(jì)數(shù)板上的細(xì)胞??２丄４細(xì)胞活力測(cè)試??（０按細(xì)胞傳代步驟（〇?－?（４）獲得細(xì)胞沉淀（２）加入少許（Ｘ－ＭＥＭ，用滴管輕較吹打混勻。??（３）加入等體積的０．４％臺(tái)盼藍(lán)染液，染色２－３?ｍｉ（４）酒精棉球擦洗計(jì)數(shù)板和蓋玻片后用擦鏡紙稍稍移向一側(cè)，露出計(jì)數(shù)板臺(tái)面少許。??（５）用滴管輕輕吹打細(xì)胞懸液后，立即從蓋玻充滿(mǎn)蓋玻片和計(jì)數(shù)板之間的間隙。??（６）光學(xué)顯微鏡下計(jì)數(shù)死亡細(xì)胞（被臺(tái)盼藍(lán)染計(jì)算細(xì)胞巧力。??２丄５

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]脊髓神經(jīng)元微小RNA-132在小鼠骨癌痛中的作用[J]. 劉玥,侯百靈,劉明,夏天嬌,孫蓓,張羽,冷鑫,石林玉,顧小萍,馬正良.  中華麻醉學(xué)雜志. 2014 (06)



本文編號(hào)：3240202