目的:通過細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn),探究晚期糖基化終產(chǎn)物（Advanced glycation end products,AGEs）對人關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞中IL-1β和TNF-α的影響,觀察AMPK/SIRT-1在此過程中的作用及其與PPARγ的關(guān)系。方法:（1）不同濃度的AGEs（25μg/ml,50μg/ml,75μg/ml,100μg/ml）分別處理人關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞24h后用Western Blot方法檢測細(xì)胞內(nèi)炎性因子IL-1β、TNF-α的蛋白表達(dá)水平,并用q-PCR檢測細(xì)胞內(nèi)IL-1β、TNF-α的m RNA含量。（2）AGEs（100μg/ml）處理人關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞6h,12h,18h,24h后,用Western Blot測定炎性因子IL-1β、TNF-α的蛋白濃度,并用q-PCR檢測細(xì)胞內(nèi)IL-1β、TNF-α的m RNA含量。（3）不同濃度的AGEs（25μg/ml,50μg/ml,75μg/ml,100μg/ml）處理人關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞24h后,Western Blot方法檢測細(xì)胞p-AMPK、AMPK、SIRT-1的蛋白表達(dá)。（4）AGEs（100μg/ml）處理人關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞6h,12h,... 

【文章來源】：湖南師范大學(xué)湖南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

AGEs對人關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞IL-1β的影響（量效）

AMPK/SIRT-1 在晚期糖基化終產(chǎn)物誘導(dǎo)人軟骨細(xì)胞 IL-1β與 TNF-α表達(dá)中的作用表達(dá)差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。隨 AGEs 處理時間的增加，IL-1β的蛋白含量與β-actin 的比值逐漸增高，從 0.25±0.12 到 1.05±0.11，P 值均<0.05；mRNA的相對表達(dá)量也逐漸增高，與對照組相比，24h 組的 mRNA 表達(dá)水平升高了 9.84倍，P 值均<0.05，如圖 1-3。

圖 1-4 AGEs 對人關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞 TNF-α的影響（時效）。100μg/ml BSA-AGEs 刺激人關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞 0-24h，Western Blot 和 q-PCR 分別檢測 TNF-α蛋白濃度和 mRNA 水平。（A）WesternBlot 檢測結(jié)果；（B）Western Blot 條帶灰度分析結(jié)果；（C）q-PCR 分析結(jié)果。所有數(shù)據(jù)以X±SD 表示，n=3。*p<0.05，**p＜0.01，***p＜0.001，與對照組（0h）比較。3.2 AGEs 對人關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞 AMPK 和 SIRT-1 表達(dá)的影響在不同劑量（25μg/ml, 50μg/ml, 75μg/ml, 100μg/ml）的 BSA-AGEs 處理人關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞 24h 后，使用 Western Blot 測定人關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞內(nèi) AMPK 磷酸化水平和 SIRT-1 蛋白表達(dá)水平。結(jié)果顯示，AMPK 磷酸化水平和 SIRT-1 蛋白表達(dá)水平均較對照組（0 μg/ml）明顯降低（P<0.05）, 且均以 AGEs 濃度為 100μg/ml時作用最為明顯。隨 AGEs 濃度的增加，p-AMPK 與 AMPK 的比值逐漸減低，從 1.19±0.15 到 0.32±0.13，P 值均<0.05，如圖 2-1。隨 AGEs 濃度的增加，SIRT-1與β-actin 的比值逐漸減低，從 1.16±0.08 到 0.13±0.02，P 值均<0.05，如圖 2-2。

【參考文獻(xiàn)】：
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