發(fā)布時間：2021-05-28 15:11

　　目的:驗證缺血后適應（Ischemic post-conditioning,IPC）對大鼠脊髓缺血再灌注損傷（Spinal cord ischemia reperfusion injury,SCIRI）的保護作用并檢測其對鈣敏感受體（Calcium-sensing receptor,CaSR）及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激相關(guān)標志物Caspase-12表達的影響。方法:五十只SD大鼠被完全隨機化等分為5個組（為充分避免因不同動物個體之間的差異而產(chǎn)生隨機誤差）:假手術(shù)組（Sham組）,缺血再灌注模型組（IR組）,IR模型+缺血后適應組（IPC組）,IPC組+激動劑（IPC-GdCl3組）和IR模型+抑制劑組（NPS2390組）。Sham組在手術(shù)中只需顯露大鼠腹主動脈的一段而不用動脈夾阻斷血流,其余各組阻斷腹主動脈25分鐘左右后再松開,構(gòu)建脊髓IR模型;IPC組于恢復血流3-4分鐘后給予三個周期的缺血后適應操作;IPC-GdCl3組在連續(xù)2天尾靜脈注射CaSR激動劑GdCl3后行IPC組操作;對于NPS2390組我們采取的干預方法是提前2天,每天通過尾靜脈注射一定量的NPS2390,隨后建立IR模型。通過3... 

【文章來源】：江蘇大學江蘇省

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

暴露右腎動脈和左腎動脈之間的腹主動脈段

缺血后適應干預大鼠脊髓再灌注損傷時對CaSR和Caspase-12的影響20（4）待切片晾干燥，半數(shù)切片每張滴加一滴CaSR抗體（1:400），另一半每張張滴加一滴Caspase-12抗體（1:400），所有切片于濕盒中4℃環(huán)境下孵育過夜。（5）各切片分別用PBS洗濯兩次，每張滴加一滴HRP，37℃條件下孵育半小時，最后用PBS洗凈并烘干。（6）拿出新配的DAB顯色液滴加在切片上，顯微鏡下觀察并控制操作，數(shù)分鐘后用蘇木素復染、清水漂洗、藍化，脫水過程參照前文使用梯度酒精的流程，二甲苯透明處理、樹膠封固晾干后CaSR切片選攘200高倍視野，Caspase-12切片選攘400高倍視野，于鏡下觀察。CaSR陽性產(chǎn)物呈棕色或褐色、Caspase-12陽性產(chǎn)物呈藍色，拍照保存圖像數(shù)據(jù)。3.5實驗結(jié)果3.5.1蛋白質(zhì)免疫印跡試驗圖3.1蛋白質(zhì)印跡法檢測各組CaSR及Caspase-12蛋白表達

免疫組化觀察各組CaSR表達（×200）

【參考文獻】：
期刊論文
[1]大鼠脊髓缺血再灌注損傷后鈣敏感受體的表達變化及其抑制劑NPS2390的作用[J]. 浦夢安,孫繼芾,束浩明,孫勇,黃永輝.  江蘇大學學報(醫(yī)學版). 2019(01)
[2]內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激中Caspase-12的核心作用[J]. 謝羽,孫警輝,伍春蓮.  基因組學與應用生物學. 2017(09)
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[9]炙馬錢子對實驗性兔脊髓損傷Tarlov評分的影響[J]. 張芹,楊科朋,侯群,魏新俠,魏丹丹.  中國醫(yī)藥科學. 2014(09)
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碩士論文
[1]腰動脈結(jié)扎后脊髓缺血神經(jīng)損傷與修復的實驗研究[D]. 傅超鋒.福建醫(yī)科大學 2016
[2]阿托伐他汀增強脊髓損傷大鼠內(nèi)皮祖細胞動員及促進神經(jīng)修復的實驗研究[D]. 魏正軍.天津醫(yī)科大學 2012
[3]預先靜脈注射維生素C對兔脊髓缺血再灌注損傷的保護作用[D]. 李貴振.華中科技大學 2010
[4]鈣敏感受體對大鼠肝臟缺血—再灌注損傷的影響及機制[D]. 邢文婧.哈爾濱醫(yī)科大學 2010



本文編號：3208272