目的探討不同濃度的氯胺酮對人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞（SH-SY5Y）的活性和增殖能力的影響,明確氯胺酮的神經(jīng)毒性;并探索Yes相關(guān)蛋白（Yes-associated protein,YAP）的表達(dá)量不同時對氯胺酮介導(dǎo)的神經(jīng)毒性的調(diào)控,探索YAP在促進(jìn)細(xì)胞增殖方面的作用。方法實(shí)驗(yàn)用SH-SY5Y細(xì)胞獲贈于上海中醫(yī)藥大學(xué)神經(jīng)退行性疾病研究組,柯尊記實(shí)驗(yàn)課題組,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)方法用DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基（Dulbecco^’s Modified Eagle Medium）進(jìn)行培養(yǎng),在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中每兩天更換一次新鮮培養(yǎng)液。為保證不同處理?xiàng)l件下的細(xì)胞狀態(tài)大致相同,所有實(shí)驗(yàn)均選用復(fù)蘇后第2-4次傳代的細(xì)胞。1.按標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)SH-SY5Y細(xì)胞,傳代24小時后細(xì)胞貼壁時給予氯胺酮處理,使之形成不同的終濃度。實(shí)驗(yàn)細(xì)胞分為6組,分別為:H₂O₂誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的陽性對照組（P組）,即向細(xì)胞液中加入H₂O₂試劑,使細(xì)胞所處培養(yǎng)液的終濃度為400?M;空白對照組（B組）;根據(jù)給予氯胺酮濃度的不同,將實(shí)驗(yàn)組分為四個濃度梯度:... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中英文縮略詞表
中文摘要
Abstract
1.引言
2.實(shí)驗(yàn)材料
    2.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
    2.2 實(shí)驗(yàn)用抗體
    2.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑
    2.4 實(shí)驗(yàn)儀器
3.實(shí)驗(yàn)方法
    3.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞培養(yǎng)
    3.2 CCK-8 細(xì)胞增殖毒性檢測
    3.3 免疫熒光染色
    3.4 流式細(xì)胞術(shù)
    3.5 蛋白印跡法（Western blotting）
    3.6 siRNA和 Lipofectamine2000 脂質(zhì)轉(zhuǎn)染
    3.7 YAP-shRNA重組慢病毒感染
    3.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4.1 氯胺酮對SH-SY5Y細(xì)胞的毒性作用
    4.2 不同濃度氯胺酮對SH-SY5Y細(xì)胞的活性及增殖能力的影響
    4.3 氯胺酮可誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞凋亡
    4.4 YAP表達(dá)水平上調(diào)對氯胺酮所致的SH-SY5Y細(xì)胞增殖和活性的影響
    4.5 YAP過表達(dá)降低氯胺酮誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞凋亡蛋白的產(chǎn)生
    4.6 YAP過表達(dá)降低了氯胺酮誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞凋亡率
    4.7 YAP表達(dá)水平下調(diào)可促進(jìn)氯胺酮誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞凋亡
5.討論
6.結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號：3160369