發(fā)布時(shí)間：2021-04-24 20:01

　　目的:研究姜黃素聯(lián)合5-Aza-CdR是否能增強(qiáng)對(duì)骨肉瘤抑癌基因P16,PTEN的去甲基化作用。方法:（1）單獨(dú)或聯(lián)合使用不同質(zhì)量濃度的姜黃素與5-Aza-CdR作用于骨肉瘤細(xì)胞;（2）觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)情況和形態(tài)變化（采用倒置相差顯微鏡）;（3）CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率;（4）甲基化特異性聚合酶鏈反應(yīng)（methyl-ation specific PCR,MSP）法檢測(cè)干預(yù)前后骨肉瘤Saos-2細(xì)胞PTEN基因和P16基因的甲基化狀態(tài);（5）RT-PCR檢測(cè)相關(guān)基因P16,PTEN的表達(dá)情況;（6）western blot檢測(cè)P16,PTEN蛋白水平的表達(dá)情況。結(jié)果:（1）姜黃素和5-Aza-CdR均呈現(xiàn)出以時(shí)間和濃度梯度依賴性的關(guān)系抑制骨肉瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。（2）MSP法檢測(cè)結(jié)果提示姜黃素與5-Aza-CdR單獨(dú)及聯(lián)合使用均有一定的去甲基化作用,二者聯(lián)合使用時(shí)去甲基化作用比單獨(dú)作用時(shí)效果明顯增強(qiáng)。（3）與空白對(duì)照組相比,RT-PCR和western blot結(jié)果提示姜黃素與5-Aza-CdR聯(lián)合使用時(shí),P16,PTEN的基因、蛋白表達(dá)水平均增高（P<0.05）。結(jié)論:（1）姜黃素... 

【文章來(lái)源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：40 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
中英文縮略詞表
第1章 引言
第2章 材料和方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 細(xì)胞株來(lái)源
        2.1.2 主要試劑及耗材
        2.1.3 主要儀器
        2.1.4 主要試劑配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 器材的準(zhǔn)備
        2.2.2 人骨肉瘤Saos-2 細(xì)胞的復(fù)蘇、培養(yǎng)和傳代
        2.2.3 用倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)
        2.2.4 CCK-8 法測(cè)定Saos-2 細(xì)胞增殖
        2.2.5 細(xì)胞的DNA提取
        2.2.6 亞硫酸氫鹽修飾基因組DNA
        2.2.7 Western-blot檢測(cè)相關(guān)蛋白表達(dá)水平
        2.2.8 RT-PCR檢測(cè)相關(guān)基因表達(dá)水平
    2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
第3章 結(jié)果
    3.1 細(xì)胞形態(tài)觀察
    3.2 細(xì)胞增值測(cè)定
    3.3 藥物作用于人骨肉瘤Saos-2 細(xì)胞前后的p16和PTEN基因甲基化的變化
    3.4 RT-PCR檢測(cè)各組PTEN、P16 mRNA表達(dá)水平的結(jié)果
        3.4.1 總RNA完整性檢測(cè)
        3.4.2 RT-PCR結(jié)果及灰度分析結(jié)果顯示
    3.5 Western blot檢測(cè)各組PTEN、P16蛋白的表達(dá)水平
第4章 討論
第5章 結(jié)論與不足之處
    5.1 結(jié)論
    5.2 不足之處
致謝
參考文獻(xiàn)
綜述
    References


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]PTEN甲基化及其異常表達(dá)與膀胱移行細(xì)胞癌的關(guān)系[J]. 延敏博,孫華賓,劉燕,徐白生.  第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 2012(12)
[2]DNA甲基化與癌癥[J]. 韓競(jìng)男,魯昊騁,梁靜.  中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào). 2012(02)
[3]抑癌基因甲基化異常在肝癌中的研究進(jìn)展及臨床應(yīng)用[J]. 孫靜哲,楊學(xué)習(xí).  廣東醫(yī)學(xué). 2011(04)
[4]腫瘤抑制基因p53的研究進(jìn)展[J]. 成秀梅.  現(xiàn)代診斷與治療. 2008(03)
[5]PTTG、c-myc在人骨肉瘤中的表達(dá)及其意義[J]. 肖強(qiáng),王體沛.  臨床外科雜志. 2007(11)
[6]去甲基化在腫瘤治療中的作用[J]. 張嘉玲,蘇秀蘭.  中國(guó)誤診學(xué)雜志. 2006(23)



本文編號(hào)：3157988