目的研究circRNA在人激素性股骨頭壞死標本中的表達情況,明確差異表達circRNA的表達譜,并驗證差異表達的circRNA,篩選出目標分子;研究circUSP45對細胞功能如細胞增殖、細胞凋亡和成骨分化的調控作用,從細胞和分子生物學水平驗證circUSP45調控細胞功能的機制;深入研究circUSP45/miR-127-5p/PTEN/AKT信號軸在激素性股骨頭壞死中的調控機制,并通過大鼠激素性股骨頭壞死模型進行驗證。方法第一部分:收集臨床激素性股骨頭壞死的股骨頭和股骨頸骨折股骨頭樣本,通過傾向值匹配的方法進一步篩選出個體差異較小的樣本,并通過circRNA二代測序和生信分析篩選出差異表達的circRNA并構建circRNA表達譜,最后通過q-PCR驗證差異表達的circRNA,并選定最終深入研究的circRNA。第二部分:在細胞水平使用地塞米松處理細胞,通過q-PCR驗證circUSP45在細胞水平和臨床樣本是否一致;通過CCK-8、EdU染色驗證circUSP45對細胞增殖能力的影響;通過TUNEL染色、western blotting和Annexin V FITC-PI凋亡雙... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學天津市 211工程院校

【文章頁數】：122 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

臨床樣本篩選的流程圖

Male 39 (56.52) 51 (34.23)Female 30 (34.23) 98 (65.77)表 1.2 傾向值匹配之后的結果After pairing SONFH Fracture P-valueN=40 N=40Age mean(95%CI) 53.90 (50.59,57.43) 55.83 (52.40,59.48) 0.44BMI mean(95%CI) 22.72 (21.83,23.66) 22.83 (21.93,23.76) 0.87Gender n(%) 0.12Male 25 (62.50) 18 (45)Female 15 (37.50) 22 (55)另外，我們將篩選出的三個激素性股骨頭壞死的股骨頭與三個由于創(chuàng)傷行髖關節(jié)置換的股骨頭進行大體觀察、X 線觀察（圖 1.2），并評估病人 X 線平片進一步確認并評估股骨頭的形態(tài)以及影像學特征（圖 1.3）。

圖 1.3 激素性股骨頭壞死患者與創(chuàng)傷行髖關節(jié)置換患者的術前 X 線平片 circRNA 二代測序與 circRNA 表達網絡的構建首先我們檢測提取 RNA 的濃度和質量（表 1.3），并通過電泳檢測各個條帶 的完整性和 gDNA 污染（圖 1.4）。表 1.3 各個測序樣本的 RNA 濃度與 RNA 總量品編號 樣品名稱 OD260/280比值 濃度(ng/μl) 體積 (μl) 數量 (μg)1 1 1.90440229.672 2 1.91414 29.103 3 2.05468 210.314 4 1.92452 29.955 5 2.00490 210.796 6 1.97446 29.82


本文編號：3146648