目的研究circRNA在人激素性股骨頭壞死標(biāo)本中的表達(dá)情況,明確差異表達(dá)circRNA的表達(dá)譜,并驗(yàn)證差異表達(dá)的circRNA,篩選出目標(biāo)分子;研究circUSP45對(duì)細(xì)胞功能如細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡和成骨分化的調(diào)控作用,從細(xì)胞和分子生物學(xué)水平驗(yàn)證circUSP45調(diào)控細(xì)胞功能的機(jī)制;深入研究circUSP45/miR-127-5p/PTEN/AKT信號(hào)軸在激素性股骨頭壞死中的調(diào)控機(jī)制,并通過大鼠激素性股骨頭壞死模型進(jìn)行驗(yàn)證。方法第一部分:收集臨床激素性股骨頭壞死的股骨頭和股骨頸骨折股骨頭樣本,通過傾向值匹配的方法進(jìn)一步篩選出個(gè)體差異較小的樣本,并通過circRNA二代測(cè)序和生信分析篩選出差異表達(dá)的circRNA并構(gòu)建circRNA表達(dá)譜,最后通過q-PCR驗(yàn)證差異表達(dá)的circRNA,并選定最終深入研究的circRNA。第二部分:在細(xì)胞水平使用地塞米松處理細(xì)胞,通過q-PCR驗(yàn)證circUSP45在細(xì)胞水平和臨床樣本是否一致;通過CCK-8、EdU染色驗(yàn)證circUSP45對(duì)細(xì)胞增殖能力的影響;通過TUNEL染色、western blotting和Annexin V FITC-PI凋亡雙... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：122 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

臨床樣本篩選的流程圖

Male 39 (56.52) 51 (34.23)Female 30 (34.23) 98 (65.77)表 1.2 傾向值匹配之后的結(jié)果After pairing SONFH Fracture P-valueN=40 N=40Age mean(95%CI) 53.90 (50.59,57.43) 55.83 (52.40,59.48) 0.44BMI mean(95%CI) 22.72 (21.83,23.66) 22.83 (21.93,23.76) 0.87Gender n(%) 0.12Male 25 (62.50) 18 (45)Female 15 (37.50) 22 (55)另外，我們將篩選出的三個(gè)激素性股骨頭壞死的股骨頭與三個(gè)由于創(chuàng)傷行髖關(guān)節(jié)置換的股骨頭進(jìn)行大體觀察、X 線觀察（圖 1.2），并評(píng)估病人 X 線平片進(jìn)一步確認(rèn)并評(píng)估股骨頭的形態(tài)以及影像學(xué)特征（圖 1.3）。

圖 1.3 激素性股骨頭壞死患者與創(chuàng)傷行髖關(guān)節(jié)置換患者的術(shù)前 X 線平片 circRNA 二代測(cè)序與 circRNA 表達(dá)網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建首先我們檢測(cè)提取 RNA 的濃度和質(zhì)量（表 1.3），并通過電泳檢測(cè)各個(gè)條帶 的完整性和 gDNA 污染（圖 1.4）。表 1.3 各個(gè)測(cè)序樣本的 RNA 濃度與 RNA 總量品編號(hào) 樣品名稱 OD260/280比值 濃度(ng/μl) 體積 (μl) 數(shù)量 (μg)1 1 1.90440229.672 2 1.91414 29.103 3 2.05468 210.314 4 1.92452 29.955 5 2.00490 210.796 6 1.97446 29.82


本文編號(hào)：3146648