目的:探討骨肉瘤（osteosarcoma,OS）細(xì)胞的增殖及MTDH（Metadherin）介導(dǎo)的自噬在順鉑化療敏感性中的作用,進(jìn)一步研究microRNA-22對其調(diào)控的作用機(jī)制,為骨肉瘤的靶向治療提供新的思路。方法:通過體外培養(yǎng)骨肉瘤細(xì)胞系MG-63進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究,將培養(yǎng)所得細(xì)胞分成ctrl組,NC組,cisplatin組,cisplatin+miR-22組。利用MTT檢測法和細(xì)胞克隆實(shí)驗(yàn)分別在6,12,24h檢測MG-63細(xì)胞增殖的變化,運(yùn)用MDC染色檢測MG-63細(xì)胞自噬的程度,并且運(yùn)用LC3流式檢測實(shí)驗(yàn)檢測自噬相關(guān)蛋白LC3表達(dá)的變化。利用透射電鏡實(shí)驗(yàn)（TEM）檢測cisplatin和miR-22聯(lián)合處理對骨肉瘤細(xì)胞自噬的影響,定量PCR法檢測Beclin1、LC3、ATG5、MTDH的mRNA表達(dá)變化,Western blotting定量檢測Beclin1、LC3、ATG5、MTDH的蛋白表達(dá)。L uciferase assay（熒光素酶）檢測自噬基因MTDH是否為miR-22的直接靶點(diǎn),Western blotting和定量PCR檢測miR-22過表達(dá)和干擾時,MTDH表達(dá)... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

12、24小時不同組中骨肉瘤細(xì)胞增殖的變化

圖 2 cisplatin 和 miR-22 對 MG-63 細(xì)胞克隆形成的影響*P < 0.05 **P < 0.01 ctrl-順鉑未處理組 NC-陰性對照 cisplatin-順鉑組cisplatin+miR-22 - miR-22 和順鉑共處理組2.2 miR-22 可抑制骨肉瘤細(xì)胞中自噬的產(chǎn)生為了驗(yàn)證骨肉瘤細(xì)胞中 miR-22 調(diào)節(jié)自噬的作用，本研究將 MG-63 細(xì)胞系分為 ctrl 組，NC 組，cisplatin 組，cisplatin+miR-22 組四組。加入 200μL 的 MDC染色液和 DAPI，分別在 6,12,24 小時用激光共聚焦顯微鏡拍照。結(jié)果顯示順鉑可促進(jìn) MG-63 細(xì)胞中自噬的表達(dá)，而 miR-22 可抑制由順鉑引起的細(xì)胞自噬(圖 3)。然后用流式細(xì)胞儀檢測自噬相關(guān)因子 LC3 的表達(dá)，進(jìn)而闡述 MG-63 細(xì)胞系中自噬的表達(dá)。結(jié)果表明順鉑促進(jìn)細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白 LC3 的表達(dá)(15.23±0.153)，miR-22可明顯抑制順鉑引起的細(xì)胞LC3表達(dá)升高(12.57±0.306)(圖4，**P < 0.01)。接下來用透射電子顯微鏡（TEM）對 MG-63 細(xì)胞中自噬溶酶體進(jìn)行評價，結(jié)果發(fā)現(xiàn)每組細(xì)胞中均有自噬溶酶體的存在，隨著時間的延長，自噬小體慢慢產(chǎn)生，

圖 3 順鉑和 miR-22 對 MG-63 細(xì)胞自噬的影響ctrl-順鉑未處理組 NC-陰性對照 cisplatin-順鉑組 cisplatin+miR-22 - miR-22 和順鉑共處理組

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]骨肉瘤化療耐藥相關(guān)基因的研究進(jìn)展[J]. 邱俊駿,施鑫,趙建寧,吳蘇稼.  醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報. 2005(02)



本文編號：3143449