脊髓損傷（spinal cord injury,SCI）可導(dǎo)致嚴(yán)重的中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙。嗅鞘細胞（olfactory ensheathing cells,OECs）是一種特殊的神經(jīng)膠質(zhì)細胞,兼具施旺細胞和星形膠質(zhì)細胞雙重性質(zhì),能夠分泌多種神經(jīng)營養(yǎng)因子、促進軸突延伸及抑制膠質(zhì)瘢痕的形成。因此,OECs移植已成為治療SCI的潛在策略。盡管大量研究證明移植的OECs能夠參與神經(jīng)系統(tǒng)在細胞和組織水平上的重建,但SCI后移植OECs歸巢到受損區(qū)域的關(guān)鍵因素仍不清楚。更重要的是,OECs的遷移能力己被證明與其發(fā)揮促軸突生長及再髓鞘化功能密切相關(guān)。溶血磷脂酸（lysophosphatidic acid,LPA）是一種生物活性脂質(zhì)介質(zhì),在調(diào)節(jié)干細胞遷移,誘導(dǎo)移植細胞定植于損傷中心過程中起重要作用。LPA通過偶聯(lián)其6種不同的G蛋白偶聯(lián)受體（LPAR1-6）激活多種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑,包括小GTP酶Ras和Rho,以及包括MAPKs、PI3K和PKC在內(nèi)的蛋白激酶。有研究證實LPA可通過ERK1/2信號介導(dǎo)OECs的遷移、增殖和細胞骨架組裝。β-catenin是Wnt信號通路的轉(zhuǎn)錄共調(diào)節(jié)因子,可在胚胎發(fā)育過程... 

【文章來源】：蘇州大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２?Ａ－Ｂ），具有典型的雙極，三極或更不規(guī)則的??形狀，大約１０?ｄ后相互纏繞交織成網(wǎng)狀

在差速貼壁后的第３ｄＯＥＣｓ逐漸從細胞團簇中爬出。Ｂ：?ＯＥＣｓ形態(tài)特征出??現(xiàn)雙極、三級或多級形態(tài)并相互交織成網(wǎng)狀。Ｃ－Ｄ：?ＯＥＣｓ免疫熒光染色，ＮＧＦＲｐ７５??（綠色），ＤＡＰＩ（藍色）。Ｅ：?ｍｅｒｇｅ后圖像顯示＞９４％的細胞為ＮＧＦＲＰ７５＋，Ｂａｒ＝２５０??（ｉｍ。??為了評估ＯＥＣｓ在體外的定向遷移，我們利用Ｂｏｙｄｅｎ?ｃｈａｍｂｅｒ裝置檢測ＯＥＣｓ??向不同濃度ＬＰＡ的趨化性遷移，我們發(fā)現(xiàn)ＬＰＡ以濃度依賴性方式誘導(dǎo)ＯＥＣｓ定向遷??移，且在５｜ｉＭ時效果最顯著（圖３Ａ，Ｃ），后續(xù)以此濃度進行研究。通過ｑＲＴ－ＰＣＲ進??一步檢測ＯＥＣｓ中ＬＰＡ受體的表達，結(jié)果顯示與ＬＰＡＲ２和ＬＰＡＲ３相比，ＬＰＡＲ１的??表達量最高（圖３Ｂ），為ＯＥＣｓ表面最主要的ＬＰＡ受體亞型。??Ａ?．?Ｂ??ｓ?＊?．．?１１＾??ｉｎｎｌｌｌ?ｌ：ＬＬｍ??°?ｉ?＾?￣?？?￣（ＭＭ）?，，／１??Ｃｏｎｔｒｏｌ?０．１?（ｉＭ?ｌ｜ｉＭ?５＾ｉＭ?１０［ｉＭ??圖３．?ＬＰＡ誘導(dǎo)ＯＥＣｓ體外遷移及其受體表達??Ａ：不同濃度ＬＰＡ體外均可誘導(dǎo)ＯＥＣｓ趨化性遷移，呈濃度依賴性且在５?ｐＭ濃??度下作用最為顯著。Ｂ：?ｑＲＴ－ＰＣＲ檢測ＯＥＣｓ中ＬＰＡＲ１、ＬＰＡＲ２、ＬＰＡＲ３的表達量。??Ｃ：在ＬＰＡ誘導(dǎo)體外遷移６?ｈ后，結(jié)晶紫染色穿過濾膜的細胞。Ｂａｒ?＝１００?｜ａｍ，每組??實驗ｎ＝３，?＊Ｐ＜０．０５，＊＊Ｐ＜０．０１。??為了證實ＬＰＡＲ１在ＬＰＡ誘導(dǎo)的ＯＥＣｓ遷移中的作用，我們發(fā)現(xiàn)當(dāng)Ｋｉｌ６４２５??（ＬＰＡＲ１／３拮抗劑）存在的情況下顯著抑制了?ＬＰＡ誘導(dǎo)的ＯＥＣｓ遷移（圖４Ａ）；為??

嗅鞘細胞歸巢的作用及機制研究?實驗結(jié)果??（ＬＰＡＲｌ－ｓｈＲＮＡ），首先通過?ｑＲＴ－ＰＣＲ?及?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ?檢測?ＯＥＣｓ?中?ＬＰＡＲ１?的表達量，??檢測慢病毒千擾效率，干擾ＬＰＡＲ１的ＯＥＣｓ中ＬＰＡＲ１的表達量下降了?８０％?（圖??４Ｂ－Ｃ）。接下來，Ｂｏｙｄｅｎ?ｃｈａｍｂｅｒ?qū)嶒灆z測干擾了?ＬＰＡＲ１的ＯＥＣｓ向ＬＰＡ的趨化性??遷移能力，與對照組（轉(zhuǎn)染ｓｃｒａｍｂｌｅ－ｓｈＲＮＡ）相比，當(dāng)ＯＥＣｓ中ＬＰＡＲ１被干擾后，??其趨化性遷移能力顯著降低（圖４Ｄ）。總之，以上結(jié)果表明ＬＰＡＲ１介導(dǎo)ＬＰＡ誘導(dǎo)的??ＯＥＣｓ體外遷移。??Ａ?？?ｃ?１．５－１?口?ｓｃｒａｍｂｌｅ??３１?Ｉ?１?＾?ｍ?ｓｈ－ＬＰＡＲ１??Ｉ?Ｉ?１．０．??ｉ?■??■??Ｉ?１－?｜??幽?＿?１。．。丨?Ｉ?，?Ｉ?＿??Ｚ?Ｊ１．?，?Ｉ?Ｕ?＿?＿?／?／??ｙ?＊?ｚ?＊?ｆ??ｃ?Ｄ?”??ＬＰＡＲ１?ｆＨＰＭＭ??Ｚ?Ｚ?ｓ?Ｊｌ．?Ｉ?＿?＿?＿??＾?＾?＾ｔ＾ＰＡＲＩ?：?？?？?＾??Ｃｏｎｔｒｏｌ?ＬＰＡ??圖４．?ＬＰＡＲｌ介導(dǎo)ＬＰＡ誘導(dǎo)ＯＥＣｓ的遷移??Ａ：在Ｂｏｙｄｅｎ?ｃｈａｍｂｅｒ上下室均加入ＬＰＡＲｌ受體抑制劑Ｋｉｌ６４２５，?ＯＥＣｓ向ＬＰＡ??的遷移能力顯著被抑制。Ｂ和Ｃ：?ｑＲＴ－ＰＣＲ及Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ檢測ＬＰＡＲｌ表達從而驗證??ＬＰＡＲｌ的千擾效率，以亂序的Ｓｃｒａｍｂｌｅ?ｓｌｉＲＮＡ為ｃｏｎｔｒｏｌ進行比較，標(biāo)準(zhǔn)化為１。Ｄ：??以感染了?Ｓｃｒａｍｂｌｅ慢病毒的ＯＥＣｓ為對照，Ｂｏｙｄｅｎ?ｃｈａｍｂｅｒ檢

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Efficacy of chitosan and sodium alginate scaffolds for repair of spinal cord injury in rats[J]. Zi-ang Yao,Feng-jia Chen,Hong-li Cui,Tong Lin,Na Guo,Hai-ge Wu.  Neural Regeneration Research. 2018(03)
[2]中國創(chuàng)傷性脊髓損傷流行病學(xué)和疾病經(jīng)濟負擔(dān)的系統(tǒng)評價[J]. 陳星月,陳棟,陳春慧,王凱,唐笠,李宇哲,吳愛憫.  中國循證醫(yī)學(xué)雜志. 2018(02)
[3]透明質(zhì)酸支架材料:應(yīng)用研究與產(chǎn)品轉(zhuǎn)化前景[J]. 張曉鷗,呂旸,毛華,范馨儀,黃思玲,郭學(xué)平.  中國組織工程研究. 2018(02)
[4]Human placenta-derived mesenchymal stem cells loaded on linear ordered collagen scaffold improves functional recovery after completely transected spinal cord injury in canine[J]. Sufang Han,Zhifeng Xiao,Xing Li,Huan Zhao,Bin Wang,Zhixue Qiu,Zhi Li,Xin Mei,Bai Xu,Caixia Fan,Bing Chen,Jin Han,Yanzheng Gu,Huilin Yang,Qin Shi,Jianwu Dai.  Science China（Life Sciences）. 2018(01)
[5]絲素蛋白多孔支架聯(lián)合硫酸軟骨素酶ABC對脊髓損傷的治療作用[J]. 尤克民,沈憶新,陳道東,范志海,張鵬,張鋒,左保齊.  中華創(chuàng)傷雜志. 2014 (09)
[6]絲素蛋白/透明質(zhì)酸復(fù)合多孔支架材料的表征及細胞相容性[J]. 范志海,陸福男,張鋒,沈憶新.  中國組織工程研究. 2012(29)
[7]不同直徑絲素蛋白納米纖維對嗅鞘細胞生長影響的研究[J]. 范志海,吳鵬,左保齊,張煥相,沈憶新.  中華臨床醫(yī)師雜志(電子版). 2012(11)
[8]絲素蛋白多孔支架在大鼠脊髓血管化中的實驗研究[J]. 謝亮,沈憶新,王新宏,范志海,左保齊,張鋒.  中國現(xiàn)代醫(yī)藥雜志. 2012(04)
[9]Wnt3a signaling promotes proliferation,myogenic differentiation,and migration of rat bone marrow mesenchymal stem cells[J]. Yan-chang SHANG~(2,3),Shu-hui WANG~4,Fu XIONG~5,Cui-ping ZHAO~2,Fu-ning PENG~2,Shan-wei FENG~2,Mei-shan LI~2,YongLI~5,Cheng ZHANG~(2,5,6)~2 Department of Neurology First Affiliated Hospital,Sun Yat-sen University,Guangzhou 510080,China,~3 Department of Geriatric NeurologyChinese People’s Liberation Army General Hospital,Beijing 100853,China;~4 Department of Neurology,Beijing Friendship Hospital,CapitalMedical University,Beijing 100050,China,~5 Center for Stem Cell Biology and Tissue Engineering,Sun Yat-sen University Guangzhou510080.China.  Acta Pharmacologica Sinica. 2007(11)
[10]膠原或明膠吸附施萬細胞移植促進全橫斷脊髓損傷修復(fù)的研究[J]. 吳立志,曾園山,李海標(biāo),蔡道章,張燕青,郭家松,丁英,陳穗君.  解剖學(xué)報. 2003(03)



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