脊髓損傷（spinal cord injury,SCI）可導(dǎo)致嚴(yán)重的中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙。嗅鞘細(xì)胞（olfactory ensheathing cells,OECs）是一種特殊的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞,兼具施旺細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞雙重性質(zhì),能夠分泌多種神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子、促進(jìn)軸突延伸及抑制膠質(zhì)瘢痕的形成。因此,OECs移植已成為治療SCI的潛在策略。盡管大量研究證明移植的OECs能夠參與神經(jīng)系統(tǒng)在細(xì)胞和組織水平上的重建,但SCI后移植OECs歸巢到受損區(qū)域的關(guān)鍵因素仍不清楚。更重要的是,OECs的遷移能力己被證明與其發(fā)揮促軸突生長(zhǎng)及再髓鞘化功能密切相關(guān)。溶血磷脂酸（lysophosphatidic acid,LPA）是一種生物活性脂質(zhì)介質(zhì),在調(diào)節(jié)干細(xì)胞遷移,誘導(dǎo)移植細(xì)胞定植于損傷中心過(guò)程中起重要作用。LPA通過(guò)偶聯(lián)其6種不同的G蛋白偶聯(lián)受體（LPAR1-6）激活多種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑,包括小GTP酶Ras和Rho,以及包括MAPKs、PI3K和PKC在內(nèi)的蛋白激酶。有研究證實(shí)LPA可通過(guò)ERK1/2信號(hào)介導(dǎo)OECs的遷移、增殖和細(xì)胞骨架組裝。β-catenin是Wnt信號(hào)通路的轉(zhuǎn)錄共調(diào)節(jié)因子,可在胚胎發(fā)育過(guò)程... 

【文章來(lái)源】：蘇州大學(xué)江蘇省

【文章頁(yè)數(shù)】：57 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２?Ａ－Ｂ），具有典型的雙極，三極或更不規(guī)則的??形狀，大約１０?ｄ后相互纏繞交織成網(wǎng)狀

在差速貼壁后的第３ｄＯＥＣｓ逐漸從細(xì)胞團(tuán)簇中爬出。Ｂ：?ＯＥＣｓ形態(tài)特征出??現(xiàn)雙極、三級(jí)或多級(jí)形態(tài)并相互交織成網(wǎng)狀。Ｃ－Ｄ：?ＯＥＣｓ免疫熒光染色，ＮＧＦＲｐ７５??（綠色），ＤＡＰＩ（藍(lán)色）。Ｅ：?ｍｅｒｇｅ后圖像顯示＞９４％的細(xì)胞為ＮＧＦＲＰ７５＋，Ｂａｒ＝２５０??（ｉｍ。??為了評(píng)估ＯＥＣｓ在體外的定向遷移，我們利用Ｂｏｙｄｅｎ?ｃｈａｍｂｅｒ裝置檢測(cè)ＯＥＣｓ??向不同濃度ＬＰＡ的趨化性遷移，我們發(fā)現(xiàn)ＬＰＡ以濃度依賴性方式誘導(dǎo)ＯＥＣｓ定向遷??移，且在５｜ｉＭ時(shí)效果最顯著（圖３Ａ，Ｃ），后續(xù)以此濃度進(jìn)行研究。通過(guò)ｑＲＴ－ＰＣＲ進(jìn)??一步檢測(cè)ＯＥＣｓ中ＬＰＡ受體的表達(dá)，結(jié)果顯示與ＬＰＡＲ２和ＬＰＡＲ３相比，ＬＰＡＲ１的??表達(dá)量最高（圖３Ｂ），為ＯＥＣｓ表面最主要的ＬＰＡ受體亞型。??Ａ?．?Ｂ??ｓ?＊?．．?１１＾??ｉｎｎｌｌｌ?ｌ：ＬＬｍ??°?ｉ?＾?￣?？?￣（ＭＭ）?，，／１??Ｃｏｎｔｒｏｌ?０．１?（ｉＭ?ｌ｜ｉＭ?５＾ｉＭ?１０［ｉＭ??圖３．?ＬＰＡ誘導(dǎo)ＯＥＣｓ體外遷移及其受體表達(dá)??Ａ：不同濃度ＬＰＡ體外均可誘導(dǎo)ＯＥＣｓ趨化性遷移，呈濃度依賴性且在５?ｐＭ濃??度下作用最為顯著。Ｂ：?ｑＲＴ－ＰＣＲ檢測(cè)ＯＥＣｓ中ＬＰＡＲ１、ＬＰＡＲ２、ＬＰＡＲ３的表達(dá)量。??Ｃ：在ＬＰＡ誘導(dǎo)體外遷移６?ｈ后，結(jié)晶紫染色穿過(guò)濾膜的細(xì)胞。Ｂａｒ?＝１００?｜ａｍ，每組??實(shí)驗(yàn)ｎ＝３，?＊Ｐ＜０．０５，＊＊Ｐ＜０．０１。??為了證實(shí)ＬＰＡＲ１在ＬＰＡ誘導(dǎo)的ＯＥＣｓ遷移中的作用，我們發(fā)現(xiàn)當(dāng)Ｋｉｌ６４２５??（ＬＰＡＲ１／３拮抗劑）存在的情況下顯著抑制了?ＬＰＡ誘導(dǎo)的ＯＥＣｓ遷移（圖４Ａ）；為??

嗅鞘細(xì)胞歸巢的作用及機(jī)制研究?實(shí)驗(yàn)結(jié)果??（ＬＰＡＲｌ－ｓｈＲＮＡ），首先通過(guò)?ｑＲＴ－ＰＣＲ?及?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ?檢測(cè)?ＯＥＣｓ?中?ＬＰＡＲ１?的表達(dá)量，??檢測(cè)慢病毒千擾效率，干擾ＬＰＡＲ１的ＯＥＣｓ中ＬＰＡＲ１的表達(dá)量下降了?８０％?（圖??４Ｂ－Ｃ）。接下來(lái)，Ｂｏｙｄｅｎ?ｃｈａｍｂｅｒ?qū)嶒?yàn)檢測(cè)干擾了?ＬＰＡＲ１的ＯＥＣｓ向ＬＰＡ的趨化性??遷移能力，與對(duì)照組（轉(zhuǎn)染ｓｃｒａｍｂｌｅ－ｓｈＲＮＡ）相比，當(dāng)ＯＥＣｓ中ＬＰＡＲ１被干擾后，??其趨化性遷移能力顯著降低（圖４Ｄ）�？傊陨辖Y(jié)果表明ＬＰＡＲ１介導(dǎo)ＬＰＡ誘導(dǎo)的??ＯＥＣｓ體外遷移。??Ａ?？?ｃ?１．５－１?口?ｓｃｒａｍｂｌｅ??３１?Ｉ?１?＾?ｍ?ｓｈ－ＬＰＡＲ１??Ｉ?Ｉ?１．０．??ｉ?■??■??Ｉ?１－?｜??幽?＿?１。．。丨?Ｉ?，?Ｉ?＿??Ｚ?Ｊ１．?，?Ｉ?Ｕ?＿?＿?／?／??ｙ?＊?ｚ?＊?ｆ??ｃ?Ｄ?”??ＬＰＡＲ１?ｆＨＰＭＭ??Ｚ?Ｚ?ｓ?Ｊｌ．?Ｉ?＿?＿?＿??＾?＾?＾ｔ＾ＰＡＲＩ?：?？?？?＾??Ｃｏｎｔｒｏｌ?ＬＰＡ??圖４．?ＬＰＡＲｌ介導(dǎo)ＬＰＡ誘導(dǎo)ＯＥＣｓ的遷移??Ａ：在Ｂｏｙｄｅｎ?ｃｈａｍｂｅｒ上下室均加入ＬＰＡＲｌ受體抑制劑Ｋｉｌ６４２５，?ＯＥＣｓ向ＬＰＡ??的遷移能力顯著被抑制。Ｂ和Ｃ：?ｑＲＴ－ＰＣＲ及Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ檢測(cè)ＬＰＡＲｌ表達(dá)從而驗(yàn)證??ＬＰＡＲｌ的千擾效率，以亂序的Ｓｃｒａｍｂｌｅ?ｓｌｉＲＮＡ為ｃｏｎｔｒｏｌ進(jìn)行比較，標(biāo)準(zhǔn)化為１。Ｄ：??以感染了?Ｓｃｒａｍｂｌｅ慢病毒的ＯＥＣｓ為對(duì)照，Ｂｏｙｄｅｎ?ｃｈａｍｂｅｒ檢

【參考文獻(xiàn)】：
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