目的1:應(yīng)用熒光量子點(diǎn)標(biāo)記嗅鞘細(xì)胞;2:探討嗅鞘細(xì)胞治療脊髓損傷的最佳移植時(shí)間窗。方法1.用NASH差速貼壁法分離并提純SD大鼠乳鼠嗅球來(lái)源嗅鞘細(xì)胞,提取成功后用免疫熒光法鑒定嗅鞘細(xì)胞并測(cè)定嗅鞘細(xì)胞的純度,用CCK-8試劑盒檢測(cè)不同代次的細(xì)胞生長(zhǎng)并繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn);2.用熒光量子點(diǎn)標(biāo)記嗅鞘細(xì)胞,用CCK-8試劑盒檢測(cè)10nm、20nm、30nm、40nm等濃度量子點(diǎn)標(biāo)記嗅鞘細(xì)胞的毒性并繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn),相同濃度量子點(diǎn)標(biāo)記不同密度嗅鞘細(xì)胞并觀察期標(biāo)記效率;3.建立大鼠脊髓半切損傷模型,選取建模成功的大鼠模型,在脊髓損傷后1D、3D、7D、10D時(shí)間點(diǎn)移植用量子點(diǎn)標(biāo)記的嗅鞘細(xì)胞,在細(xì)胞移植后1D灌注固定后取出損傷處的脊髓,用小動(dòng)物呈像儀檢測(cè)聚集到損傷處熒光量大小,用免疫熒光法,檢測(cè)轉(zhuǎn)移到損傷處嗅鞘細(xì)胞。結(jié)果1.用差速貼壁法提取分離的嗅鞘細(xì)胞,顯微鏡觀察呈現(xiàn)出典型的雙極、三級(jí)嗅鞘細(xì)胞形態(tài),并且胞質(zhì)透光性好,免疫熒光法測(cè)定的嗅鞘細(xì)胞計(jì)算后的純度大于85%;2.CCk-8法檢測(cè)不同代次細(xì)胞生長(zhǎng)并繪制生長(zhǎng)曲線(xiàn),P5代細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)最好;3:不同濃度量子點(diǎn)轉(zhuǎn)染嗅鞘細(xì)胞后,對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)均有抑制作用,量子點(diǎn)... 

【文章來(lái)源】：寧夏醫(yī)科大學(xué)寧夏回族自治區(qū)

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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SD新生鼠原代分離、培養(yǎng)的嗅

寧夏醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文結(jié)果21圖2：SD新生鼠嗅球來(lái)源OECs不同代次細(xì)胞的增殖能力的生長(zhǎng)曲線(xiàn)1.4熒光量子點(diǎn)轉(zhuǎn)染嗅鞘細(xì)胞以及用DIPA轉(zhuǎn)染嗅鞘細(xì)胞的結(jié)果熒光量子點(diǎn)標(biāo)記嗅鞘細(xì)胞：用綠色熒光光源激發(fā)，細(xì)胞質(zhì)呈現(xiàn)出均勻的紅色熒光，細(xì)胞核無(wú)熒光，并且有很高標(biāo)記率（圖1A）；DIPA轉(zhuǎn)染嗅鞘細(xì)胞：用青色熒光光源激發(fā)，細(xì)胞核呈現(xiàn)出藍(lán)色熒光，細(xì)胞質(zhì)無(wú)熒光；（圖1B）將不同熒光標(biāo)記的細(xì)胞圖片整合，細(xì)胞核在細(xì)胞中央（藍(lán)色熒光），胞質(zhì)為均勻的紅色熒光。（圖1C）從而更好的顯現(xiàn)出嗅鞘細(xì)胞核的形態(tài)，以及胞質(zhì)。ABC圖3：圖A為用熒光量子點(diǎn)標(biāo)記的嗅鞘細(xì)胞；圖B為用DIPA標(biāo)記的嗅鞘細(xì)胞；圖C為量子點(diǎn)與DIPA標(biāo)記整合的圖片1.5量子點(diǎn)轉(zhuǎn)染不同密度嗅鞘細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效果應(yīng)用相同濃度的量子點(diǎn)轉(zhuǎn)染不同密度的細(xì)胞（圖4），圖A為量子點(diǎn)轉(zhuǎn)染低密度細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效果，計(jì)算標(biāo)記效率為98％；圖B為量子點(diǎn)轉(zhuǎn)染的較高細(xì)胞密度的轉(zhuǎn)染效果，其

寧夏醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文結(jié)果26圖7：隨著脊髓損傷時(shí)間的推移，聚集在損傷處的熒光值逐漸升高，7d移植組時(shí)為最大值，隨后10d移植組熒光均值小于C組，開(kāi)始下降。

【參考文獻(xiàn)】：
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