目的及意義脊髓損傷后神經(jīng)突觸可塑性的變化（樹突棘密度及成熟度的變化）對脊髓損傷的修復(fù)至關(guān)重要。樹突棘是突觸后的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ),其形態(tài)與突觸可塑性密切相關(guān)。目前關(guān)于Spastin的研究報道主要包括在軸突運輸、軸突分支和側(cè)枝形成等方面。SUMO化修飾作用在神經(jīng)系統(tǒng)及突觸形成等方面起重要作用,且本實驗室已驗證Spastin能被SUMO修飾。然而Spastin以及其SUMO化修飾狀態(tài)的是否能夠調(diào)節(jié)突觸可塑性尚待探討。本研究主要目的為SUMO化修飾Spastin是如何調(diào)控樹突的生長調(diào)控機制,以及如何調(diào)節(jié)突觸可塑性。探討Spastin及其SUMO化在樹突生長發(fā)育的調(diào)控機制,不僅有利于認識神經(jīng)元信息的調(diào)控機制,也可讓我們深入理解神經(jīng)疾病及神經(jīng)損傷的本質(zhì)過程,為治療神經(jīng)發(fā)育障礙及神經(jīng)損傷疾病提供新的理論支持。材料與方法首先采用免疫細胞化學(xué)染色,明確Spastin及與SUMO在樹突及樹突棘中是否存在共定位,進而發(fā)揮作用;其次構(gòu)建了Spastin及其SUMO化相關(guān)表達載體,并過表達于體外培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元中,觀察SUMO化修飾調(diào)控Spastin在神經(jīng)元樹突伸長、分支形成及樹突棘發(fā)育中發(fā)揮的作用,觀察神經(jīng)元細胞膜表... 

【文章來源】：暨南大學(xué)廣東省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：92 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

SUMO化修飾Spastin或去SUMO化修飾Spastin對樹突生長的影響

實驗結(jié)果暨南大學(xué)碩士學(xué)位論文26圖3.3SUMOylatedSpastin或deSUMOylatedSpastin對樹突棘形態(tài)的影響。（A）用Spastin或SUMO1轉(zhuǎn)染DIV10海馬神經(jīng)元以研究SUMO化Spastin對樹突棘的影響。在DIV14處投射Z-堆疊共聚焦圖像，并且顯示了海馬神經(jīng)元和代表性樹突片段的代表性圖像。（B）用Spastin及其deSUMOylation突變體轉(zhuǎn)染DIV10海馬神經(jīng)元，以研究deSUMOylatedSpastin對樹突棘的影響。（C）用Spastin或SENP1轉(zhuǎn)染DIV10海馬神經(jīng)元以研究deSUMOylatedSpastin對樹突棘的影響。測量樹突棘密度，樹突棘的形狀類型和形狀類型的脊柱百分比，并且值表示為來自三個獨立實驗的平均值±SD。*與NC相比P<0.05;與指示的對照相比，＃P<0.05。比例尺，50μm，10μm（放大）。Figure3.3EffectsonthemorphologyofdendriticspinebySUMOylatedSpastinordeSUMOylatedSpastin.(A)DIV10hippocampalneuronsweretransfectedwithSpastinorSUMO1toinvestigatetheeffectofSUMOylatedSpastinondendriticspine.Z-stackconfocalimageswereprojectedatDIV14andrepresentativeimagesofhippocampalneuronsandrepresentativedendriticsegmentswereshown.(B)DIV10hippocampalneuronsweretransfectedwithSpastinanditsdeSUMOylationmutanttoinvestigatetheeffectofdeSUMOylatedSpastinondendriticspine.(C)DIV10hippocampalneuronsweretransfectedwithSpastinorSENP1toinvestigatetheeffectofdeSUMOylatedSpastinondendriticspine.Thedendriticspinedensity,theshapetypeofdendriticspineandthespinepercentagebyshapetypeweremeasuredandvaluewererepresentedasthemean±SDfromthreeindependentexperiments.*P<0.05versusNC;#P<0.05versusindicatedcontrol.Scalebar,50μm，10μm（Enlarg

實驗結(jié)果暨南大學(xué)碩士學(xué)位論文28圖3.4SUMO化Spastin或deSUMOylatedSpastin對表面GluA1表達的影響。（A）用Spastin和SUMO1轉(zhuǎn)染DIV10海馬神經(jīng)元并在DIV14固定。通過抗GluA1檢測表面GluA1信號。使用共聚焦獲得圖像，在實驗中應(yīng)用于所有樣品的相同設(shè)置，顯示代表性圖像。（B）用deSUMO化Spastin突變體Spastin-K427R轉(zhuǎn)染DIV10海馬神經(jīng)元并在DIV14固定。通過抗GluA1檢測表面GluA1信號。定量GluA1信號的熒光強度。將值測量為來自三個獨立實驗的平均值±SD。*與NC相比P<0.05;與指示的對照相比，＃P<0.05。比例尺，5μm。Figure3.4EffectsontheexpressionofsurfaceGluA1levelsbySUMOylatedSpastinordeSUMOylatedSpastin.(A)DIV10hippocampalneuronsweretransfectedwithSpastinandSUMO1andfixedatDIV14.SurfaceGluA1signalsweredetectedbyanti-GluA1.Imageswereacquiredwithconfocalwithidenticalsettingsappliedtoallsamplesinanexperiment,representativeimageswereshown.(B)DIV10hippocampalneuronsweretransfectedwithdeSUMOylatedSpastinmutantSpastin-K427RandfixedatDIV14.SurfaceGluA1signalsweredetectedbyanti-GluA1.FluorescenceintensityofGluA1signalswerequantified.Valuesweremeasuredasthemean±SDfromthreeindependentexperiments.*P<0.05versusNC;#P<0.05versusindicatedcontrol.Scalebar,5μm.3.5Spastin的SUMO化是怎樣調(diào)節(jié)GluA1的轉(zhuǎn)運為了進一步證實Spastin及其不同SUMO狀態(tài)對GluA1膜轉(zhuǎn)運的影響及GluA1的轉(zhuǎn)運途徑具體細胞內(nèi)機制，我們通過追蹤已公認的早期內(nèi)吞體、循環(huán)內(nèi)


本文編號：3075756