本文關(guān)鍵詞：VEGF促進(jìn)兔同種異體骨異位預(yù)構(gòu)骨皮瓣的進(jìn)程，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：1背景高能量創(chuàng)傷因素所致的開放性骨缺損伴局部皮膚軟組織缺損者,術(shù)后骨感染發(fā)生率較高,若治療不當(dāng)易發(fā)展成為慢性骨感染,是骨科醫(yī)生的治療難題。同種異體骨來源廣泛,具有良好的生物學(xué)特性和形態(tài)結(jié)構(gòu),是目前臨床上廣泛使用的骨移植物。采用同種異體骨一期直接修復(fù)開放性或感染性骨缺損,術(shù)后感染率較高。針對這一難題,我們設(shè)想將骨組織異位預(yù)構(gòu)骨皮瓣,二期帶血管蒂的預(yù)構(gòu)骨皮瓣移植修復(fù)骨及皮膚軟組織缺損。在前期實驗中我們證實了1.5cm長的兔同種異體骨段在血管豐富的肌間隙內(nèi)8周可完成血管化過程。但人的長管狀骨的密度及厚度均較實驗動物高,其完成血管化預(yù)構(gòu)骨皮瓣的時間會相應(yīng)更長,因此,必要采用干預(yù)措施加快同種異體骨預(yù)構(gòu)骨皮瓣的進(jìn)程,縮短其預(yù)構(gòu)骨皮瓣的時間。2目的探討植入式膠囊滲透壓泵通過局部緩釋血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)促進(jìn)兔同種異體脫鈣骨異位血管化預(yù)構(gòu)骨皮瓣的進(jìn)程。3方法將150只健康6月齡中國白兔隨機(jī)分為對照組(同種異體脫鈣骨組)、實驗組(同種異體脫鈣骨+VEGF組),每組各60只,剩余20只用于制備同種異體骨。實驗組:將制備好的1.5 cm長同種異體脫鈣脛骨段置于兔右大腿股直肌與股內(nèi)側(cè)肌間隙之隱動脈處,其附近皮下植入一枚載有VEGF溶液(容積200μl、濃度0.5μg/ml)的植入式膠囊滲透壓泵;對照組:取等長同種異體骨同法置于兔右大腿相應(yīng)部位。兩組分別于術(shù)后2、4、6、8、10、12周處死白兔,取出標(biāo)本后行大體標(biāo)本觀察、鈣含量檢測、HE染色組織學(xué)檢查、免疫熒光染色(CD34、I型膠原蛋白)檢測同種異體脫鈣骨異位血管化及骨活性情況,行統(tǒng)計學(xué)處理。實驗組和對照組各補(bǔ)充5只白兔,根據(jù)實驗結(jié)果,在兩組同種異體脫鈣骨血管化達(dá)到高峰時分別對兩組白兔行隱動脈置管CT血管造影檢測,觀察隱動脈分支血管進(jìn)入異體骨段的情況。4結(jié)果隨機(jī)抽取的10個同種異體脫鈣骨分別經(jīng)細(xì)菌培養(yǎng)均未檢測到有細(xì)菌生長。隨著預(yù)構(gòu)骨皮瓣時間的延長,實驗組和對照組同種異體脫鈣骨表面及兩端髓腔粘附的纖維結(jié)締組織逐漸增多且增厚,周圍無炎性反應(yīng),纖維結(jié)締組織與骨段貼附逐漸緊密,剝離也越困難;纖維結(jié)締組織徹底剝離后,兩組同種異體脫鈣骨表面出現(xiàn)骨吸收小凹,且隨預(yù)構(gòu)骨皮瓣時間的延長小凹逐漸增多、加深;預(yù)構(gòu)的同種異體脫鈣骨皮質(zhì)逐漸變薄。HE染色結(jié)果:實驗組、對照組0周時異體骨哈弗管內(nèi)均為無結(jié)構(gòu)狀,偶見殘存的血管結(jié)構(gòu);2周開始出現(xiàn)少量纖維肉芽組織與部分脫鈣骨連接,隨后脫鈣骨內(nèi)可見吸收腔隙,出現(xiàn)少量新生血管和活的細(xì)胞成分,隨著時間的延長,哈弗管較前擴(kuò)大,并出現(xiàn)較多的血管和活細(xì)胞,周邊骨旋渦呈有規(guī)律排列,其內(nèi)可見大量破骨細(xì)胞和成骨細(xì)胞,血管管腔隨之增粗,可見成熟的的骨小梁。鈣含量檢測結(jié)果:隨預(yù)構(gòu)骨皮瓣時間的延長,實驗組和對照組同種異體脫鈣骨的鈣含量均呈大體下降趨勢。實驗組術(shù)后4周到6周,鈣含量下降明顯,兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);6周到8周時鈣含量稍有升高,但兩者差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),隨后鈣含量繼續(xù)下降。對照組術(shù)后6周到8周,鈣含量下降明顯,兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);8周到10周時鈣含量稍有升高,但兩者差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),隨后鈣含量繼續(xù)下降。CD34免疫熒光染色結(jié)果顯示:兩組CD34陽性血管數(shù)總體均呈先升高后降低趨勢。實驗組和對照組CD34陽性血管數(shù)分別在術(shù)后第6周和第8周達(dá)到高峰值,實驗組6周CD34陽性血管數(shù)多于對照組8周CD34陽性血管數(shù)(P0.05)。Ⅰ型膠原蛋白免疫熒光強(qiáng)度結(jié)果顯示:兩組熒光強(qiáng)度均表現(xiàn)為現(xiàn)先增加后緩慢減小的趨勢。實驗組和對照組Ⅰ型膠原蛋白免疫熒光強(qiáng)度分別在術(shù)后第8周、第10周達(dá)到高峰值,實驗組8周時Ⅰ型膠原蛋白熒光強(qiáng)度高于對照組10周時的Ⅰ型膠原蛋白熒光強(qiáng)度,兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。實驗組、對照組分別在預(yù)構(gòu)骨皮瓣術(shù)后6周、8周時順利完成CTA造影成像。3D-CTA成像可見:大隱動脈分支在距同種異體脫鈣骨約1~3cm處分成若干直徑約0.2~0.4 mm的小血管從同種異體脫鈣骨兩極或中部進(jìn)入骨段內(nèi),進(jìn)入實驗組同種異體脫鈣骨的血管數(shù)量較對照組多、且管徑較粗;除此之外,兩組均可見隱動脈發(fā)出皮穿支血管進(jìn)入兔大腿內(nèi)側(cè)皮膚。5結(jié)論1)兔同種異體脫鈣骨異位預(yù)構(gòu)骨皮瓣經(jīng)過8周可完成血管化,施加VEGF后,6周便可完成血管化。證實植入式膠囊滲透壓泵局部緩釋VEGF可明顯加快兔同種異體脫鈣骨異位預(yù)構(gòu)骨皮瓣的進(jìn)程。2)實驗組和對照組同種異體脫鈣骨的鈣含量隨著預(yù)構(gòu)骨皮瓣時間的延長而逐漸下降,因此,局部緩釋VEGF并不能阻止或減緩?fù)N異體脫鈣骨的骨吸收進(jìn)程。3)骨吸收會影響同種異體骨皮瓣的生物力學(xué)強(qiáng)度,應(yīng)在同種異體脫鈣骨完成預(yù)構(gòu)骨皮瓣且無明顯骨吸收時,適時進(jìn)行同種異體骨皮瓣移植。
【關(guān)鍵詞】：滲透壓泵 VEGF 同種異體脫鈣骨 異位血管化 骨皮瓣
【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R687.3
【目錄】：

• 摘要6-9
• Abstract9-14
• 前言14-16
• 1 材料和方法16-21
• 1.1 實驗材料16-18
• 1.2 移植物制備18-19
• 1.3 實驗方法19-21
• 2 觀察指標(biāo)及方法21-25
• 2.1 大體標(biāo)本觀察21-22
• 2.2 鈣含量測定22-23
• 2.3 HE染色23
• 2.4 CD34熒光免疫組織化學(xué)染色檢測23-24
• 2.5 Ⅰ型膠原蛋白熒光免疫組織化學(xué)染色24
• 2.6 統(tǒng)計學(xué)分析24-25
• 2.7 CTA檢測25
• 3 結(jié)果25-32
• 3.1 制備的同種異體脫鈣骨細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果25
• 3.2 大體標(biāo)本觀察結(jié)果25-26
• 3.3 HE染色檢測結(jié)果26
• 3.4 鈣含量檢測結(jié)果26-28
• 3.5 CD34的熒光免疫染色檢測結(jié)果28-30
• 3.6 Ⅰ型膠原蛋白熒光免疫染色檢測結(jié)果30-32
• 3.7 隱動脈穿刺CTA檢測結(jié)果32
• 4 結(jié)論32
• 5 討論32-41
• 6 小結(jié)41-43
• 附圖43-50
• 參考文獻(xiàn)50-54
• 綜述 骨移植材料預(yù)構(gòu)骨皮瓣的血管化檢測方法54-63
• 參考文獻(xiàn)60-63
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況63-64
• 致謝64-66
• 個人簡歷66-67

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