目的:本研究旨在體外探討沉默Aurora-B基因表達(dá)通過PI3K/Akt/NF-κB信號通路對人骨肉瘤細(xì)胞的侵襲和遷移的影響。方法:構(gòu)建干擾Aurora-B基因表達(dá)的慢病毒載分別命名為LV-shAURKB（LV-shAURKB-1、LV-shAURKB-2、LV-shAURKB-3）和陰性對照載體LV-NC。分別轉(zhuǎn)染人骨肉瘤細(xì)胞株U2-OS細(xì)胞和HOS細(xì)胞。qRT-PCR檢測Aurora-B基因的mRNA水平。Transwell侵襲實驗和劃痕愈合實驗檢測U2-OS細(xì)胞和HOS細(xì)胞侵襲和遷移情況。采用免疫組化方法研究24例伴有肺轉(zhuǎn)移的骨肉瘤標(biāo)本中Aurora-B和p-Akt（Ser473）蛋白的表達(dá)情況,并分析它們的相關(guān)性。Western Blot檢測轉(zhuǎn)染LV-shAURKB后Aurora-B、p-Akt（Ser473）、Akt、p-PI3K（Tyr199）、PI3K、NF-κB（p65）、β-actin蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:①qRT-PCR和Western Blot實驗結(jié)果顯示與對經(jīng)轉(zhuǎn)染陰照載體組對比,轉(zhuǎn)染了LV-shAURKB組骨肉瘤細(xì)胞的Aurora-B的mRNA和蛋白水平明顯降低;... 

【文章來源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
中英文縮略詞表
第1章 前言
第2章 材料和方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 細(xì)胞來源
        2.1.2 慢病毒載體來源
        2.1.3 主要試劑與材料
    2.2 主要軟件
    2.3 主要儀器
    2.4 常用試劑的配置
    2.5 免疫組化
    2.6 慢病毒shRNA重組表達(dá)載體的構(gòu)建與測序
    2.7 細(xì)胞復(fù)蘇、培養(yǎng)傳代、凍存、轉(zhuǎn)染
    2.8 Western Blot法分析U2-OS細(xì)胞和HOS細(xì)胞Aurora-B、PI3K、p-PI3K（Tyr199）、Akt、p-Akt（Ser473）、NF-κB（p65）的表達(dá)
    2.9 qRT-PCR法分析各組人U2-OS細(xì)胞和HOS細(xì)胞內(nèi)Aurora-B的表達(dá)
    2.10 劃痕愈合實驗
    2.11 Transwell侵襲實驗
    2.12 統(tǒng)計學(xué)方法
第3章 結(jié)果
    3.1 shAURKB干擾載體測序結(jié)果
    3.2 LV-shAURKB慢病毒載體轉(zhuǎn)染抑制骨肉瘤細(xì)胞Aurora-B的表達(dá)
    3.3 沉默Aurora-B的表達(dá)水平能夠抑制骨肉瘤細(xì)胞株U2-OS細(xì)胞和HOS細(xì)胞的侵襲能力
    3.4 沉默Aurora-B的表達(dá)水平能夠抑制骨肉瘤細(xì)胞株U2-OS細(xì)胞和HOS細(xì)胞的遷移能力
    3.5 骨肉瘤組織標(biāo)本中Aurora-B和p-Akt（Ser473）的相關(guān)性
    3.6 沉默Aurora-B對PI3K/Akt/NF-κB信號通路相關(guān)蛋白的影響
第4章 討論
第5章 結(jié)論與展望
致謝
參考文獻(xiàn)
附圖
攻讀學(xué)位期間的研究成果
綜述
    參考文獻(xiàn)


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3051121