目的:本研究旨在體外探討沉默Aurora-B基因表達(dá)通過(guò)PI3K/Akt/NF-κB信號(hào)通路對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞的侵襲和遷移的影響。方法:構(gòu)建干擾Aurora-B基因表達(dá)的慢病毒載分別命名為L(zhǎng)V-shAURKB（LV-shAURKB-1、LV-shAURKB-2、LV-shAURKB-3）和陰性對(duì)照載體LV-NC。分別轉(zhuǎn)染人骨肉瘤細(xì)胞株U2-OS細(xì)胞和HOS細(xì)胞。qRT-PCR檢測(cè)Aurora-B基因的mRNA水平。Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)和劃痕愈合實(shí)驗(yàn)檢測(cè)U2-OS細(xì)胞和HOS細(xì)胞侵襲和遷移情況。采用免疫組化方法研究24例伴有肺轉(zhuǎn)移的骨肉瘤標(biāo)本中Aurora-B和p-Akt（Ser473）蛋白的表達(dá)情況,并分析它們的相關(guān)性。Western Blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染LV-shAURKB后Aurora-B、p-Akt（Ser473）、Akt、p-PI3K（Tyr199）、PI3K、NF-κB（p65）、β-actin蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:①qRT-PCR和Western Blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示與對(duì)經(jīng)轉(zhuǎn)染陰照載體組對(duì)比,轉(zhuǎn)染了LV-shAURKB組骨肉瘤細(xì)胞的Aurora-B的mRNA和蛋白水平明顯降低;... 

【文章來(lái)源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：53 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
中英文縮略詞表
第1章 前言
第2章 材料和方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 細(xì)胞來(lái)源
        2.1.2 慢病毒載體來(lái)源
        2.1.3 主要試劑與材料
    2.2 主要軟件
    2.3 主要儀器
    2.4 常用試劑的配置
    2.5 免疫組化
    2.6 慢病毒shRNA重組表達(dá)載體的構(gòu)建與測(cè)序
    2.7 細(xì)胞復(fù)蘇、培養(yǎng)傳代、凍存、轉(zhuǎn)染
    2.8 Western Blot法分析U2-OS細(xì)胞和HOS細(xì)胞Aurora-B、PI3K、p-PI3K（Tyr199）、Akt、p-Akt（Ser473）、NF-κB（p65）的表達(dá)
    2.9 qRT-PCR法分析各組人U2-OS細(xì)胞和HOS細(xì)胞內(nèi)Aurora-B的表達(dá)
    2.10 劃痕愈合實(shí)驗(yàn)
    2.11 Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)
    2.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
第3章 結(jié)果
    3.1 shAURKB干擾載體測(cè)序結(jié)果
    3.2 LV-shAURKB慢病毒載體轉(zhuǎn)染抑制骨肉瘤細(xì)胞Aurora-B的表達(dá)
    3.3 沉默Aurora-B的表達(dá)水平能夠抑制骨肉瘤細(xì)胞株U2-OS細(xì)胞和HOS細(xì)胞的侵襲能力
    3.4 沉默Aurora-B的表達(dá)水平能夠抑制骨肉瘤細(xì)胞株U2-OS細(xì)胞和HOS細(xì)胞的遷移能力
    3.5 骨肉瘤組織標(biāo)本中Aurora-B和p-Akt（Ser473）的相關(guān)性
    3.6 沉默Aurora-B對(duì)PI3K/Akt/NF-κB信號(hào)通路相關(guān)蛋白的影響
第4章 討論
第5章 結(jié)論與展望
致謝
參考文獻(xiàn)
附圖
攻讀學(xué)位期間的研究成果
綜述
    參考文獻(xiàn)


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Aurora-B激酶及其抑制劑研究進(jìn)展[J]. 董丹丹,肖燕燕,劉偉,周紅剛,楊誠(chéng).  藥學(xué)學(xué)報(bào). 2013(04)
[2]Aurora-B、Ki-67在骨肉瘤中的表達(dá)及與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的關(guān)系[J]. 劉志禮,尹慶水,舒勇,黃山虎,羅赟,周揚(yáng),王高,鄒平安.  解放軍醫(yī)學(xué)雜志. 2011(11)
[3]慢病毒載體介導(dǎo)RNAi的研究進(jìn)展[J]. 李英明,陳燕慧.  生物技術(shù)通報(bào). 2009(07)



本文編號(hào)：3051121