發(fā)布時(shí)間：2021-02-18 05:28

　　目的:創(chuàng)傷后肌腱粘連發(fā)生率高,導(dǎo)致運(yùn)動(dòng)功能障礙,臨床治療尚缺乏有效靶點(diǎn)。巨噬細(xì)胞是組織粘連的調(diào)控者,可通過細(xì)胞間“通訊”的方式改變靶細(xì)胞的功能和表型,而由外泌體（Exosome）介導(dǎo)的microRNAs傳遞在細(xì)胞間“通訊”以及疾病發(fā)生發(fā)展中具有重要作用。本研究從Exosome介導(dǎo)的細(xì)胞間“通訊”的角度出發(fā),探索巨噬細(xì)胞來源的Exosomal-microRNA在肌腱粘連形成中的作用及分子機(jī)制,為創(chuàng)傷后肌腱粘連的防治提供新的理論依據(jù)和分子靶標(biāo)。方法:首先,對比野生型小鼠和巨噬細(xì)胞缺失小鼠（藥物構(gòu)建）中趾深屈肌腱術(shù)后的粘連程度（從大體觀、生物力學(xué)、組織學(xué)及蛋白表達(dá)評估）,闡明巨噬細(xì)胞在肌腱粘連形成中的作用;然后,體外提取骨髓來源的巨噬細(xì)胞的外泌體,回輸巨噬細(xì)胞缺失小鼠體內(nèi),闡明巨噬細(xì)胞來源的外泌體在肌腱粘連形成中的作用;隨后,體外實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證明巨噬細(xì)胞來源外泌體對成纖維和肌腱細(xì)胞功能的影響;之后,利用二代測序技術(shù)確定巨噬細(xì)胞來源外泌體內(nèi)microRNAs含量,并利用體外轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證含量最高的microRNA-21-5p對成纖維和肌腱細(xì)胞功能的影響;最后,利用生物信息學(xué)分析預(yù)測microRNA... 

【文章來源】：上海交通大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：105 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

實(shí)驗(yàn)方案模式圖

按照文獻(xiàn)所報(bào)道方法,利用跖趾關(guān)節(jié)的活動(dòng)角度來測定趾深屈肌腱的滑動(dòng)功能[99,101]。每組取5個(gè)樣本,于膝關(guān)節(jié)水平處離斷后肢,并將皮膚剝脫移至踝關(guān)節(jié)水平。將趾深屈肌腱脛骨近端水平游離并顯露,固定于自制夾具;將脛骨固定于力學(xué)測試儀的固定器,于趾深屈肌腱近端逐漸加載0-19g的重量,在每次加載重量時(shí)拍攝數(shù)字圖像,從數(shù)字圖像測量跖趾關(guān)節(jié)的屈曲角度。跖趾關(guān)節(jié)屈曲角度對應(yīng)于施加19g重物時(shí)的屈曲度,未受傷的肌腱在19g施重時(shí)跖趾關(guān)節(jié)可完全屈曲[23]�；瑒�(dòng)阻力基于所施加載荷范圍的跖趾關(guān)節(jié)彎曲角度的變化,越高的滑動(dòng)阻力,表明滑動(dòng)功能受損和粘連形成,每組五個(gè)樣本,測量示意圖如圖2所示。2.2.2.6肌腱生物力學(xué)測評

肌腱滑動(dòng)測試后,按照文獻(xiàn)報(bào)道方法測定肌腱拉伸強(qiáng)度[99,100]。脛骨在踝關(guān)節(jié)水平移除,將趾深屈肌腱近端和遠(yuǎn)端部分分別固定在Instron 8841DynaMightTM軸向液壓測試儀(Instron Corporation,Norwood,MA)上的定制夾具,以30mm/分鐘的速率測試肌腱的張力直至肌腱被拉斷,自動(dòng)記錄肌腱斷裂時(shí)的最大負(fù)載,同時(shí)在力-位移曲線的線性區(qū)域的斜率處計(jì)算剛度,每組五個(gè)樣本,測量示意圖如圖3所示。2.2.2.7組織學(xué)評估


本文編號：3039101