發(fā)布時(shí)間：2021-02-14 03:52

　　目的:骨肉瘤（Osteosarcoma,OS）是青少年最常見(jiàn)的惡性骨腫瘤,全世界的發(fā)病率約0.0004%。骨肉瘤的發(fā)生與多種micro RNAs（mi RNAs）的異常表達(dá)相關(guān)。外泌體（Exosome,Exos）mi RNAs在細(xì)胞間通訊中受到越來(lái)越多的關(guān)注。腫瘤來(lái)源的外泌體可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)及其腫瘤血管生成。mi R-1307已被發(fā)現(xiàn)在多種腫瘤中異常表達(dá),但其在骨肉瘤中的研究迄今為止沒(méi)有相關(guān)報(bào)道。本研究旨在檢測(cè)骨肉瘤來(lái)源的外泌體mi R-1307對(duì)骨肉瘤細(xì)胞增殖、遷移、侵襲和凋亡的影響。方法:購(gòu)買(mǎi)人骨肉瘤細(xì)胞系（U2OS、HOS、SW1353、Saos-2和143B）和人正常成骨h FOB 1.19細(xì)胞系。培養(yǎng)SW1353骨肉瘤細(xì)胞和h FOB 1.19正常成骨細(xì)胞,通過(guò)差速離心法提取骨肉瘤外泌體（OS-Exos）和正常成骨細(xì)胞外泌體（h FOB 1.19-Exos）。透射式電子顯微鏡（Transmission Electron Microscope,TEM）和納米粒子追蹤分析（Nanoparticle Tracking Analysis,NTA）驗(yàn)證所分離的細(xì)胞外顆粒是否為外泌... 

【文章來(lái)源】：石河子大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū) 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：79 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

骨肉瘤外泌體的特征及其鑒定

骨肉瘤外泌體miR-1307對(duì)骨肉瘤細(xì)胞增殖、遷移、侵襲和凋亡的影響32（1.86±0.14），與對(duì)照組相比，骨肉瘤外泌體（OS-Exos）顯著促進(jìn)了骨肉瘤細(xì)胞的增殖水平，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。以上數(shù)據(jù)表明骨肉瘤外泌體以旁分泌的方式促進(jìn)骨肉瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，符合研究初期的預(yù)測(cè)。圖2：hFOB1.19成骨細(xì)胞的外泌體（hFOB1.19-Exos）和骨肉瘤外泌體（OS-Exos）對(duì)骨肉瘤細(xì)胞增殖能力的影響。轉(zhuǎn)染hFOB1.19-Exos或OS-Exos后不同時(shí)間骨肉瘤細(xì)胞增殖能力的代表性圖像。*P＜0.05，**P＜0.013骨肉瘤外泌體促進(jìn)骨肉瘤細(xì)胞的遷移和侵襲細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明骨肉瘤外泌體可以明顯的促進(jìn)骨肉瘤細(xì)胞的增殖，所以接下來(lái)進(jìn)一步驗(yàn)證骨肉瘤外泌體對(duì)骨肉瘤細(xì)胞遷移和侵襲的影響。首先分別培養(yǎng)SW1353骨肉瘤細(xì)胞和hFOB1.19成骨細(xì)胞并分別提取相應(yīng)細(xì)胞所分泌的外泌體。骨肉瘤外泌體（OS-Exos）和hFOB1.19成骨細(xì)胞的外泌體（hFOB1.19-Exos）分別作為實(shí)驗(yàn)組和正常對(duì)照組，通過(guò)Transwell檢測(cè)骨肉瘤細(xì)胞的遷移（小室內(nèi)不含基質(zhì)膠）和侵襲（小室內(nèi)含有基質(zhì)膠）的細(xì)胞數(shù)。Transwell遷移結(jié)果表明，hFOB1.19-Exos（33±3.7），OS-Exos（125±9.6），骨肉瘤外泌體（OS-Exos）使骨肉瘤細(xì)胞遷移的細(xì)胞數(shù)明顯大于對(duì)照組(圖3A)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。同樣Transwell侵襲結(jié)果表明，hFOB1.19-Exos（28±5.6），OS-Exos（132±10.9），與對(duì)照組相比，骨肉瘤外泌體（OS-Exos）使骨肉瘤細(xì)胞侵襲的細(xì)胞數(shù)明顯增多(圖3B)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。結(jié)果表明，骨肉瘤外泌體以旁分泌的方式促進(jìn)骨肉瘤細(xì)胞的遷移和侵襲。

骨肉瘤外泌體miR-1307對(duì)骨肉瘤細(xì)胞增殖、遷移、侵襲和凋亡的影響33圖3：hFOB1.19成骨細(xì)胞外泌體（hFOB1.19-Exos）和骨肉瘤外泌體（OS-Exos）對(duì)骨肉瘤細(xì)胞遷移(A)和侵襲(B)能力影響的代表性圖像。比例尺：100um。**P<0.014骨肉瘤外泌體抑制骨肉瘤細(xì)胞的凋亡既然骨肉瘤外泌體既可以促進(jìn)骨肉瘤細(xì)胞的增殖，也可以促進(jìn)骨肉瘤細(xì)胞的遷移和侵襲，那么接下來(lái)進(jìn)一步通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)（FlowCytometry）驗(yàn)證骨肉瘤外泌體對(duì)骨肉瘤細(xì)胞凋亡水平的影響。首先，依然分別培養(yǎng)SW1353骨肉瘤細(xì)胞和hFOB1.19成骨細(xì)胞并分別提取相應(yīng)細(xì)胞所分泌的外泌體，骨肉瘤細(xì)胞外泌體（OS-Exos）和hFOB1.19成骨細(xì)胞外泌體（hFOB1.19-Exos）分別作為實(shí)驗(yàn)組和正常對(duì)照組。FlowCytometry早期凋亡率結(jié)果表明，hFOB1.19-Exos（31.33±0.19）%，OS-Exos（3.3±0.62）%，與對(duì)照組相比，經(jīng)骨肉瘤外泌體（OS-Exos）處理的骨肉瘤細(xì)胞其早期凋亡細(xì)胞明顯減少(圖4)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。FlowCytometry晚期凋亡率結(jié)果表明，hFOB1.19-Exos（0.73±0.12）%，OS-Exos（0.5±0.08）%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。FlowCytometry總凋亡率結(jié)果表明，hFOB1.19-Exos（32.07±1.23）%，OS-Exos（3.1±0.65）%，與對(duì)照組相比，骨肉瘤外泌體（OS-Exos）明顯抑制了骨肉瘤細(xì)胞的凋亡水平，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。以上數(shù)據(jù)表明骨肉瘤外泌體以旁分泌的方式抑制骨肉瘤細(xì)胞的凋亡。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Anticancer Effects of Constituents of Herbs Targeting Osteosarcoma[J]. SU Qing-hong,XU Xiao-qun,WANG Jun-fu,LUAN Jun-wen,REN Xia,HUANG Hai-yan,BIAN Si-shan.  Chinese Journal of Integrative Medicine. 2019(12)



本文編號(hào)：3033067