發(fā)布時(shí)間：2021-02-10 00:27

　　背景:手術(shù)創(chuàng)傷可引起炎性介質(zhì)通過(guò)受損的血腦屏障進(jìn)入大腦引發(fā)神經(jīng)炎癥。海馬區(qū)域的炎癥會(huì)導(dǎo)致術(shù)后認(rèn)知功能障礙（Postoperative cognitive dysfunction,POCD）。在大腦炎癥期間小膠質(zhì)細(xì)胞向促炎M1或抗炎M2極化的過(guò)程被認(rèn)為是一種主要的免疫調(diào)節(jié)方式。內(nèi)源性大麻素是一種具有抗炎作用的化合物,主要有兩種生理性配體。先前有研究發(fā)現(xiàn)大麻素受體2型受體（Cannabinoid Receptor-2,CB2R）的活化減少術(shù)后小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞的活化和腦內(nèi)炎癥。然而,CB2R的活化對(duì)術(shù)后小膠質(zhì)細(xì)胞極化是否有影響尚不清楚。本課題主要探討了七氟烷麻醉下術(shù)后CB2R的活化對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞極化的作用。實(shí)驗(yàn)方法:使用4月齡C57/6成年雄性小鼠。小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組,手術(shù)組,手術(shù)+JWH133組和手術(shù)+AM630組。采用脛骨骨折內(nèi)固定手術(shù)模型。在小鼠手術(shù)麻醉恢復(fù)后腹腔注射選擇性CB2R特異性激動(dòng)劑JWH133和拮抗劑AM630,每24小時(shí)重復(fù)注射。手術(shù)后1天和3天分別處死小鼠,獲取腦組織。使用蛋白質(zhì)免疫印跡技術(shù)檢測(cè)前額葉及海馬中CB2R的表達(dá)水平（n=24）。酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)術(shù)后1天和3天... 

【文章來(lái)源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

【文章頁(yè)數(shù)】：64 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中英文縮略詞表
中文摘要
英文摘要
1 引言
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.3 實(shí)驗(yàn)試劑
    2.4 試劑配制
    2.5 實(shí)驗(yàn)方法
        2.5.1 實(shí)驗(yàn)分組
        2.5.2 實(shí)驗(yàn)方案
        2.5.3 麻醉及手術(shù)模型
        2.5.4 組織提取及保存
        2.5.5 蛋白質(zhì)免疫印跡實(shí)驗(yàn)（Western Blot）
            2.5.5.1 組織樣本制備
            2.5.5.2 BCA蛋白濃度測(cè)定
            2.5.5.3 SDS-聚丙烯酰胺凝膠配制
            2.5.5.4 上樣及蛋白電泳
            2.5.5.5 轉(zhuǎn)膜
            2.5.5.6 麗春紅染色及封閉
            2.5.5.7 免疫雜交
            2.5.5.8 蛋白質(zhì)顯影
            2.5.5.9 圖像分析
        2.5.6 酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）
            2.5.6.1 準(zhǔn)備及配制試劑
            2.5.6.2 加樣
            2.5.6.3 加入生物素標(biāo)記抗體工作液
            2.5.6.4 洗滌孔板
            2.5.6.5 加入HRP-advin工作液
            2.5.6.6 洗板及顯色
            2.5.6.7 終止顯色
            2.5.6.8 結(jié)果判定
        2.5.7 免疫熒光
        2.5.8 實(shí)時(shí)定量 PCR（Quantitative Real-time PCR,RT-q PCR）
            2.5.8.1 RNA 提�。═rizol 法）
            2.5.8.2 逆轉(zhuǎn)錄及cDNA合成
            2.5.8.3 基因擴(kuò)增
                2.5.8.3.1 配制反應(yīng)體系
                2.5.8.3.2 進(jìn)行RT-qPCR反應(yīng)
                2.5.8.3.3 確認(rèn)RT-qPCR結(jié)果
        2.5.9 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
3 結(jié)果
    3.1 七氟烷麻醉下手術(shù)1天后前額葉和海馬中炎癥因子水平
    3.2 七氟烷麻醉下手術(shù)3天后前額葉和海馬中炎癥因子水平
    3.3 七氟烷麻醉下手術(shù)1天后前額葉和海馬中CB2R的表達(dá)
    3.4 七氟烷麻醉下手術(shù)3天后前額葉和海馬中CB2R的表達(dá)
    3.5 七氟烷麻醉下術(shù)后1天小膠質(zhì)細(xì)胞的極化表型
    3.6 七氟烷麻醉下術(shù)后3天小膠質(zhì)細(xì)胞的極化表型
4 討論
5 結(jié)論
6 參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
綜述 大腦中大麻素2型受體的表達(dá),功能及在行為和神經(jīng)精神疾病中的研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)



本文編號(hào)：3026479