目的:觀察成人膝關(guān)節(jié)OA患者軟骨組織中HDAC4的表達(dá)情況,并利用條件性敲基因小鼠敲除小鼠體內(nèi)的HDAC4以觀察小鼠膝關(guān)節(jié)炎的發(fā)生,并進(jìn)一步檢測與HDAC4相關(guān)的細(xì)胞因子的表達(dá)變化,探究HDAC4在骨關(guān)節(jié)炎中的作用及其機(jī)制。方法:1.通過番紅O固綠染色觀察成人脛骨平臺關(guān)節(jié)炎表現(xiàn),行HDAC4免疫組化觀察OA患者與正常成人HDAC4表達(dá)改變。2.培育Agg^{tm（IRES-CreERT2）};HDAC4^fl/fl條件性基因敲除鼠,將Agg^{tm（IRES-CreERT2）};HDAC4^fl/fl小鼠（共40只）分為TM組（20只）和NO TM組（20只）,選取HDAC4^fl/fl（20只）作為TM的對照組（TM control）。兩月齡TM組小鼠和TM control組小鼠注射TM（1mg/0.01kg/day,連續(xù)注射5天）;NO TM組注射植物油,方法同TM注射組。注射后小鼠自由活動。自然生長至8月齡的小鼠在處死后行番紅O固綠染色觀察小鼠膝關(guān)節(jié)退行性變化并通過OARSI評分量化改變,... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
常用縮寫詞中英文對照表
前言
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 實(shí)驗(yàn)動物
        1.1.2 主要儀器
        1.1.3 主要藥品及試劑
        1.1.4 主要溶液配制方法
        1.1.5 組織獲取器械
    1.2 實(shí)驗(yàn)方法和具體實(shí)驗(yàn)步驟
        1.2.1 成人膝關(guān)節(jié)軟骨組織的取材、固定、切片
tm（IRES-CreERT2）/+;HDAC4^fl/fl條件性敲基因小鼠的繁育">        1.2.2 Agg^{tm（IRES-CreERT2）/+};HDAC4^fl/fl條件性敲基因小鼠的繁育
        1.2.3 實(shí)驗(yàn)動物分組
        1.2.4 實(shí)驗(yàn)動物的處理
        1.2.5 PCR確定小鼠基因型
            1.2.5.1 消化至基因組DNA
tm（IRES-CreERT2）基因與HDAC4^fl/fl基因擴(kuò)增">            1.2.5.2 Agg^{tm（IRES-CreERT2）}基因與HDAC4^fl/fl基因擴(kuò)增
            1.2.5.3 2 %瓊脂糖凝膠電泳
        1.2.6 小鼠膝關(guān)節(jié)取材、固定、切片
        1.2.7 番紅O固綠染色
        1.2.8 OARSI評分
        1.2.9 HDAC4、Runx-2、Sox-9、CollagenX、MMP-13、Aggrecan、CollagenⅡ免疫組化
        1.2.10 Rt-PCR檢測
            1.2.10.1 軟骨組織中總RNA的提取
            1.2.10.2 Rt-PCR檢測HDAC4、Agg、ColⅡ、Runx2、Sox-9、ColX、Ihh、MMP-13、PTHrP和Gli1基因mRNA表達(dá)水平
        1.2.11 數(shù)據(jù)處理
2 結(jié)果
    2.1 成人膝關(guān)節(jié)OA
    2.2 成人膝關(guān)節(jié)軟骨 HDAC4 免疫組化
    2.3 子代小鼠基因型鑒定與篩選
tm（IRES-CreERT2）/+;HDAC4^fl/fl基因型小鼠與野生型小鼠對比">    2.4 兩月齡未打藥Agg^{tm（IRES-CreERT2）/+};HDAC4^fl/fl基因型小鼠與野生型小鼠對比
    2.5 HDAC4基因的敲除
    2.6 8 月齡各組小鼠膝關(guān)節(jié)改變及OARSI評分
    2.7 免疫組化檢測HDAC4基因敲除小鼠軟骨細(xì)胞肥大化及骨關(guān)節(jié)炎相關(guān)因子表達(dá)量的改變
    2.8 Rt-PCR檢測HDAC4基因敲除小鼠軟骨細(xì)胞肥大化及骨關(guān)節(jié)炎相關(guān)因子表達(dá)量的改變
3 討論
4 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
在學(xué)期間承擔(dān)/參與的科研課題與研究成果
個人簡歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Efficacy and safety evaluation of intravenous infusion of cervus and cucumis polypeptides for treatment of avascular necrosis of the femoral head: a randomized clinical trial[J]. Wei Liyou,Zhang Hongwei,Li Xinmin,Yang Chunyan,Wang Guoqiang,Zhang Lifeng,Cui Mingwu,Han Lijun.  Journal of Traditional Chinese Medicine. 2016(01)
[2]Intraarticular injections（corticosteroid, hyaluronic acid, platelet rich plasma） for the knee osteoarthritis[J]. Egemen Ayhan,Hayrettin Kesmezacar,Isik Akgun.  World Journal of Orthopedics. 2014(03)



本文編號：3005082