研究目的骨性關節(jié)炎（Osteoarthritis,OA）是一種累及全關節(jié)的退行性疾病,是導致老年人出現(xiàn)關節(jié)疼痛癥狀甚至致殘的重要原因,隨著老齡化社會的到來,OA的發(fā)病率和患病人數(shù)逐年增加。OA發(fā)病原因復雜,目前為止,仍然缺乏較好的預防和治療手段,使關節(jié)置換術成為晚期OA患者的唯一選擇,給家庭和社會帶來沉重經(jīng)濟負擔。前期研究發(fā)現(xiàn),慢性、低度的滑膜炎癥反應是OA重要的病理特征之一,在OA疾病的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。此外,異常的滑膜巨噬細胞募集和活化是介導滑膜炎癥反應及軟骨損傷的重要因素。近期本課題組報道成纖維細胞生長因子受體3（FGFR3）在OA疾病過程中對關節(jié)軟骨發(fā)揮著重要的保護作用,但其對巨噬細胞及滑膜炎癥的調控作用尚未見報道。本研究旨在揭示單核/巨噬細胞中的FGFR3在小鼠關節(jié)炎疾病過程中的作用及其具體機制,為關節(jié)炎的治療新策略提供實驗依據(jù)。研究方法1.建立FGFR3髓系細胞特異性敲除小鼠將雜合子FGFR3條件性敲除小鼠(FGFR3^flox/+)與髓系細胞特異性表達cre的LysM^cre小鼠雜交,獲得同時含有FGFR3^flo... 

【文章來源】：中國人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學重慶市

【文章頁數(shù)】：124 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

FGFR3flox/flox;LysMcre小鼠繁殖示意圖

℃ 30 秒 35℃ 30 秒 35℃ 40 秒 35℃ 10 分鐘 1 保存) 凝膠電泳鑒定基因型:取 0.9g 瓊脂糖加入錐形瓶，加入 90mL 0.5X TBE，微波爐加熱至瓊脂糖熱過程中應該時不時搖晃錐形瓶使液體受熱均勻，避免液體沸出。待瓊后停止加熱，加入 Goldview 3μl，混勻。將液體倒入凝膠槽中，配成含 G凝膠；泳條件：160v，20 分鐘。果判定：FGFR3-flox 帶（KO band）為 380 bp，野生帶（WT band）為帶約為 500bp。詳見下圖（圖 2-2）

圖 2-3 小鼠尾靜脈注射(4) 將小鼠尾巴浸泡于熱水中 5-10 秒，使其尾靜脈充分擴張，然后迅速擦干棉球消毒；(5) 將提前準備好的熒光微球從一側尾靜脈注入，每只小鼠注射 250μl。(6) 注射完畢后壓迫止血，將小鼠放回籠內，小鼠活動正常，可進一步放入養(yǎng)，3 天后對小鼠進行取材，觀察熒光微球標記的細胞在關節(jié)滑膜組織的聚2.3.16 小鼠灌注固定取材灌注固定可以對組織進行更加充分的固定，縮短固定時間，在熒光微球示蹤為了保證熒光信號不過多衰減，我們采用了灌注固定的方式對小鼠進行固定驟如下：(1) 按體重給小鼠腹腔注射戊巴比妥麻醉小鼠；(2) 小鼠麻醉后將其四肢朝上固定于支架上，剪開胸腔暴露心臟；(3) 將連接有頭皮針的 20mL 注射器（預先裝入 4%PFA）刺入左心室，可見

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Role of FGF/FGFR signaling in skeletal development and homeostasis: learning from mouse models[J]. Nan Su,Min Jin,Lin Chen.  Bone Research. 2014(01)
[2]Advances in NF-κB Signaling Transduction and Transcription[J]. Weihua Xiao~1 1 University of Science and Technology of China,China.2 Laboratory of Molecular Immunoregulation,NCI-Frederick,Frederick.MD 21702.USA..  Cellular & Molecular Immunology. 2004(06)



本文編號：2970953