研究目的骨性關(guān)節(jié)炎（Osteoarthritis,OA）是一種累及全關(guān)節(jié)的退行性疾病,是導(dǎo)致老年人出現(xiàn)關(guān)節(jié)疼痛癥狀甚至致殘的重要原因,隨著老齡化社會的到來,OA的發(fā)病率和患病人數(shù)逐年增加。OA發(fā)病原因復(fù)雜,目前為止,仍然缺乏較好的預(yù)防和治療手段,使關(guān)節(jié)置換術(shù)成為晚期OA患者的唯一選擇,給家庭和社會帶來沉重經(jīng)濟負擔(dān)。前期研究發(fā)現(xiàn),慢性、低度的滑膜炎癥反應(yīng)是OA重要的病理特征之一,在OA疾病的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。此外,異常的滑膜巨噬細胞募集和活化是介導(dǎo)滑膜炎癥反應(yīng)及軟骨損傷的重要因素。近期本課題組報道成纖維細胞生長因子受體3（FGFR3）在OA疾病過程中對關(guān)節(jié)軟骨發(fā)揮著重要的保護作用,但其對巨噬細胞及滑膜炎癥的調(diào)控作用尚未見報道。本研究旨在揭示單核/巨噬細胞中的FGFR3在小鼠關(guān)節(jié)炎疾病過程中的作用及其具體機制,為關(guān)節(jié)炎的治療新策略提供實驗依據(jù)。研究方法1.建立FGFR3髓系細胞特異性敲除小鼠將雜合子FGFR3條件性敲除小鼠(FGFR3^flox/+)與髓系細胞特異性表達cre的LysM^cre小鼠雜交,獲得同時含有FGFR3^flo... 

【文章來源】：中國人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：124 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

FGFR3flox/flox;LysMcre小鼠繁殖示意圖

℃ 30 秒 35℃ 30 秒 35℃ 40 秒 35℃ 10 分鐘 1 保存) 凝膠電泳鑒定基因型:取 0.9g 瓊脂糖加入錐形瓶，加入 90mL 0.5X TBE，微波爐加熱至瓊脂糖熱過程中應(yīng)該時不時搖晃錐形瓶使液體受熱均勻，避免液體沸出。待瓊后停止加熱，加入 Goldview 3μl，混勻。將液體倒入凝膠槽中，配成含 G凝膠；泳條件：160v，20 分鐘。果判定：FGFR3-flox 帶（KO band）為 380 bp，野生帶（WT band）為帶約為 500bp。詳見下圖（圖 2-2）

圖 2-3 小鼠尾靜脈注射(4) 將小鼠尾巴浸泡于熱水中 5-10 秒，使其尾靜脈充分擴張，然后迅速擦干棉球消毒；(5) 將提前準(zhǔn)備好的熒光微球從一側(cè)尾靜脈注入，每只小鼠注射 250μl。(6) 注射完畢后壓迫止血，將小鼠放回籠內(nèi)，小鼠活動正常，可進一步放入養(yǎng)，3 天后對小鼠進行取材，觀察熒光微球標(biāo)記的細胞在關(guān)節(jié)滑膜組織的聚2.3.16 小鼠灌注固定取材灌注固定可以對組織進行更加充分的固定，縮短固定時間，在熒光微球示蹤為了保證熒光信號不過多衰減，我們采用了灌注固定的方式對小鼠進行固定驟如下：(1) 按體重給小鼠腹腔注射戊巴比妥麻醉小鼠；(2) 小鼠麻醉后將其四肢朝上固定于支架上，剪開胸腔暴露心臟；(3) 將連接有頭皮針的 20mL 注射器（預(yù)先裝入 4%PFA）刺入左心室，可見

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Role of FGF/FGFR signaling in skeletal development and homeostasis: learning from mouse models[J]. Nan Su,Min Jin,Lin Chen.  Bone Research. 2014(01)
[2]Advances in NF-κB Signaling Transduction and Transcription[J]. Weihua Xiao~1 1 University of Science and Technology of China,China.2 Laboratory of Molecular Immunoregulation,NCI-Frederick,Frederick.MD 21702.USA..  Cellular & Molecular Immunology. 2004(06)



本文編號：2970953